bFGF促進糖尿病大鼠皮膚創(chuàng)面愈合藥效學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、目的：
　　本實驗主要通過病理學(xué)檢查及蛋白質(zhì)方面研究來探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子（recombinant human basic fibrobloast growth factor，bFGF）對糖尿病大鼠皮膚創(chuàng)面愈合的療效，并討論其治療機制，為治療糖尿病創(chuàng)口難愈性提供治療基礎(chǔ)。
　　方法：
　　本實驗大鼠以注射鏈脲佐菌素(STZ)進行糖尿病造模，造模成功2個月后進行創(chuàng)口造模。實驗動物分為N組和DM組，每組分別以自身為對

2、照，在大鼠臀部兩側(cè)，左側(cè)為對照組，右側(cè)為bFGF治療組。取樣初始時間點設(shè)在創(chuàng)口治療當(dāng)天記作0d，其后分別有4d，8d，12d，16d，用相機拍下創(chuàng)面修復(fù)情況，并將創(chuàng)口皮膚按初始面積環(huán)形剪下，剪下皮膚樣本剪切成兩部分，一部分用于病理切片，另一部分用于蛋白提取。切片部分主要觀察HE染色、Masson染色、免疫組化(IHC)。采用免疫印跡技術(shù)，檢查創(chuàng)口愈合中各種因子如介導(dǎo)炎癥、介導(dǎo)凋亡的情況。以此綜合評價bFGF對糖尿病創(chuàng)口愈合的情況。

3、>　　結(jié)果：
　　1.通過創(chuàng)口修復(fù)面積的對比，DM組中在0d-8d，bFGF組與對照組并無明顯差異，在12天以后差異明顯，主要表現(xiàn)為bFGF組創(chuàng)口修復(fù)速度加快?？梢奲FGF有促糖尿病皮膚創(chuàng)口修復(fù)的功能。N組無論在給藥還是未給藥的情況下，創(chuàng)口愈合速度均快于DM組，但bFGF組在12d后表現(xiàn)出微弱的修復(fù)優(yōu)勢。綜上可見，DM組皮膚創(chuàng)口比N組的愈合速度慢，bFGF在DM組的創(chuàng)口修復(fù)中有更為明顯的治療優(yōu)勢。
　　2.病理切片中，通過H

4、E染色和Masson染色的觀察，DM組皮膚創(chuàng)口再生的情況，bFGF可促進創(chuàng)口血管再生，皮層再生，毛發(fā)、汗腺等附屬物的再生。同時bFGF還可使促進創(chuàng)臼愈合中膠原蛋白的生成。
　　3.在免疫組化中，TGF-β1炎癥因子主要發(fā)生在創(chuàng)口修復(fù)前12d，其集中4d、8d。casepase-3凋亡因子主要集中在4d-12d，bFGF縮短了炎癥的發(fā)生時長，以及凋亡時長，但其優(yōu)勢并不特別明顯。
　　4.通過對所取的創(chuàng)口組織進行蛋白的提取，做w

5、estern blot指標(biāo)，所用抗體選擇炎癥因子TGF-β1、CTGF、PAI-1、TNF-α，凋亡因子c-casepase、casepase-3，血管生成因子CD34，以及膠原Ⅰ型，對創(chuàng)口修復(fù)過程進行蛋白質(zhì)方面的研究。
　　結(jié)論：
　　1.HE染色和Masson染色顯示bFGF能促進糖尿病大鼠皮膚創(chuàng)口愈合
　　2.免疫組化結(jié)果可見， bFGF能夠加速炎癥反應(yīng)，促進細(xì)胞凋亡。
　　3.western blot指標(biāo)