β-catenin在BMSC參與Hp慢性感染致胃癌發(fā)生中的作用.pdf

1、【目的】：
　　Wnt信號(hào)參與胃癌發(fā)生的過(guò)程,其中β-catenin/Tcf4/Fzd5是經(jīng)典Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵蛋白,骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stromal cells,BMSC)被認(rèn)為參與胃癌的發(fā)生,但具體機(jī)制尚不清楚。本課題以Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路為靶點(diǎn),通過(guò)shRNA技術(shù)干擾小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞β-catenin表達(dá),探求BMSC在幽門(mén)螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp)慢性感染致胃癌發(fā)生過(guò)

2、程中的可能機(jī)制。
　　【方法】：
　　構(gòu)建含有β-catenin-shRNA的特異性真核表達(dá)載體。BMSC用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),按2×105/孔的濃度接種于Transwell上室,37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,待細(xì)胞貼壁率達(dá)到60%后,用Lipo-fectamine2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染。β-catenin-shRNA處理組為實(shí)驗(yàn)組,shRNA錯(cuò)義序列處理組為陰性對(duì)照組。測(cè)定轉(zhuǎn)染率,轉(zhuǎn)染48h后,采

3、用WesternBlot方法檢測(cè)BMSC中β-catenin的表達(dá)。然后按照BMSC、小鼠胃癌細(xì)胞(MFC)、Hp超聲粉碎物(1:10:100)比例建立體外Transwell共培養(yǎng)體系,培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)24h后,采用Real-timePCR方法和WesternBlot方法檢測(cè)MFC中β-cateninmRNA和總蛋白的變化。
　　【結(jié)果】：
　　β-catenin-shRNA轉(zhuǎn)染BMSC48h后,BMSC中β-catenin蛋

4、白表達(dá)下降。BMSC、MFC、HP超聲粉碎物共培養(yǎng)24h后,與陰性對(duì)照組相比,shRNA干擾MSC后,MFC中β-catenin總mRNA表達(dá)下降(0.488±0.120﹔1.026±0.057﹔P<0.05),β-catenin蛋白表達(dá)亦下降(0.687±0.107﹔1.06±0.113﹔P<0.05)。
　　【結(jié)論】：
　　BMSC參與調(diào)控Hp慢性感染致胃癌發(fā)生早期事件Wnt信號(hào)通路的過(guò)程。BMSC作為一種良好的基因工程