多西他賽通過Cdc42調(diào)控乳腺癌細(xì)胞絲狀偽足形態(tài)來抑制腫瘤轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：
　　比較多柔比星和多西他賽對(duì)乳腺癌腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，探索多西他賽對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移產(chǎn)生抑制作用的機(jī)制。
　　方法：
　?、貱CK8確定多柔比星和多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的抑制濃度IC10
　?、诶昧魇郊?xì)胞術(shù)，分析在IC10濃度下，兩種化療藥物對(duì)細(xì)胞周期和凋亡情況的影響
　?、凼褂肨ranswell小室比較分析IC10濃度的兩種化療藥物對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞侵襲和遷移能力

2、的作用，并利用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色觀察細(xì)胞偽足形態(tài)改變。進(jìn)一步觀察IC10濃度下的多西他賽干預(yù)不同時(shí)間對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移、侵襲和微絲形態(tài)的影響。
　?、芾肦T-PCR和Western blot分析多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中CDC42表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　?、俣嗳岜刃呛投辔魉惸芤种?0％的乳腺癌細(xì)胞的濃度即 IC10分別為：0.5μg/mL和1.0ng/mL。
　　② IC10濃度的多柔

3、比星和多西他賽對(duì)細(xì)胞周期的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其中1.0ng/mL的多西他賽干預(yù)24小時(shí)后，G0/G1和G2/M的細(xì)胞比例為（48.8±1.7）％和（34.7±1.6）％；0.5μg/mL的多柔比星干預(yù)24小時(shí)后，G0/G1和G2/M的細(xì)胞比例為（48.7±1.5）％和（35.0±1.5）％；空白對(duì)照組為（48.1±1.3）％和（35.9±0.9）％。IC10多西他賽在干預(yù)12小時(shí)和24小時(shí)后的凋亡率分別為：(2.29±0

4、.22)％和(2.49±0.52)％，均小于5％，排除因藥物毒性作用對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。
　?、墼谶w移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，1.0ng/mL多西他賽干預(yù)組的穿過細(xì)胞數(shù)分別是(39.6±6.67和11.0±2.3)顯著低于多柔比星組(79.6±9.5和30.4±3.1)和對(duì)照組(90.2±10.9和33.6±5.7)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；多柔比星組和對(duì)照組無明顯差異（P>0.05）。12小時(shí)和24小時(shí)多西他賽干預(yù)后的遷移和侵襲結(jié)果

5、均低于正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?、芏辔魉惤M抑制乳腺癌細(xì)胞微絲的外延、偽足的形成作用較明顯，24小時(shí)干預(yù)較12小時(shí)抑制效果明顯；多柔比星組和對(duì)照組無明顯差異。
　?、荻辔魉愐种迫橄侔┘?xì)胞中CDC42基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。12h作用后mRNA相對(duì)表達(dá)量為0.900±0.175（P對(duì)照組 VS12h組>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），24h的相對(duì)表達(dá)量為0.402±0.128（P對(duì)照組 VS24h組<0.05，有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。蛋白表達(dá)情況中，其中12h和24h相對(duì)于正常對(duì)照組的表達(dá)量分別為0.52±0.13和0.34±0.13，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的CDC42的表達(dá)顯著低于對(duì)照組（P<0.05），兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　?、?IC10的藥物濃度對(duì)細(xì)胞的增殖周期和凋亡影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)可排除是因干預(yù)細(xì)胞增殖和凋亡而給結(jié)果帶來的影響。
　?、诙辔魉愝^之多柔比星能更好地抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。