PDGF-PDGFR通路調(diào)控尿毒癥腹透大鼠模型腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運增高的機制研究.pdf

1、目的：腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運增高是限制長期成功腹膜透析（腹透）的關(guān)鍵因素之一，其機制尚未完全明了。本研究旨在探討血管周細胞和內(nèi)皮細胞之間的血小板衍生因子及其受體（PDGF/PDGFR）通路對腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運增高的調(diào)控及其機制。
　　方法：雄性SD大鼠（n=36）隨機分為假手術(shù)組（n=12）、尿毒癥組（n=12）、尿毒癥腹透組（n=12）。采用5/6腎切除術(shù)構(gòu)建尿毒癥模型，5/6腎切除術(shù)加4.25％葡萄糖透析液腹腔灌注構(gòu)建尿毒癥腹透模型。采用HE

2、染色、Masson染色檢測各組大鼠腹膜形態(tài)學(xué)改變。CD31免疫組化檢測腹膜血管數(shù)目，CD31/desmin免疫熒光雙染色檢測腹膜血管周細胞覆蓋率。采用腹膜平衡試驗評估各組大鼠腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運功能，并測定腹膜血管對熒光物質(zhì)FITC-BSA（69kDa）和FITC-dextran（4kDa）的通透性。Western blot檢測腹膜PDGF/PDGFR蛋白表達。采用Image J、SPSS13.0軟件分析PDGF/PDGFR表達與腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運、

3、周細胞覆蓋率、血管通透性的關(guān)系。構(gòu)建腺病毒Ad-FLAG和Ad-PDGFR-Fc，尿毒癥腹透大鼠模型基礎(chǔ)上行尾靜脈注射，構(gòu)建Ad-FLAG組（n=10）和Ad-PDGFR-Fc組（n=10）。研究抑制PDGF蛋白表達對腹膜結(jié)構(gòu)、溶質(zhì)轉(zhuǎn)運、周細胞覆蓋率和血管通透性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.與假手術(shù)組相比，尿毒癥組大鼠腹膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，包括間皮細胞脫落、間皮下膠原纖維層增厚（136.4±39.9μm vs36.5±3.9μm

4、，P=0.048）和腹膜血管數(shù)目增多[5.5（3.75，6）vs2（1.75，3）個/HP，P=0.005]。腹透4周后，間皮細胞脫落增多、間皮下膠原纖維層增厚（654.2±142.1μm vs136.4±39.9μm，P=0.004）和腹膜血管數(shù)目增多[9（7.75，12）vs5.5（3.75，6）個/HP，P=0.004]更為明顯。尿毒癥腹透組大鼠較假手術(shù)組大鼠（0.92±0.06 vs0.50±0.09，P=0.003）和尿毒癥組

5、（0.92±0.06 vs0.65±0.13，P=0.03）腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運明顯增高。與假手術(shù)組大鼠相比，尿毒癥大鼠腹膜血管周細胞覆蓋率明顯下降（0.59±0.02 vs0.81±0.07，P=0.006），尿毒癥腹透大鼠腹膜血管周細胞覆蓋率進一步下降（0.35±0.05 vs0.59±0.02，P=0.001）。尿毒癥組大鼠腹膜血管對FITC-BSA（197.01 vs1.00，P<0.001）和FITC-dextran（105.91 v

6、s2.98，P<0.001）的通透性均較假手術(shù)組大鼠增高。腹透4周后，腹膜血管對FITC-BSA（304.16 vs197.01，P<0.001）和FITC-dextran（358.85 vs105.91，P<0.001）的通透性進一步增高。
　　2.尿毒癥組大鼠腹膜PDGF蛋白表達較假手術(shù)組大鼠下調(diào)（0.59±0.52 vs0.76±0.08，P=0.035），腹透4周后，PDGF蛋白表達進一步下調(diào)（0.47±0.04 vs0.

7、59±0.52，P=0.037）。腹膜PDGF蛋白質(zhì)表達水平與腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運（R2=0.7397，P=0.003）、腹膜血管對BSA的通透性（R2=0.8496，P<0.001）、腹膜血管對dextran的通透性（R2=0.7661，P=0.002）、周細胞覆蓋率（R2=0.7283，P=0.003）均顯著相關(guān)。
　　3. Ad-PDGFR-Fc組大鼠腹膜中PDGF表達明顯被抑制，腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運較Ad-FLAG組增高（0.68±0.0

8、7 vs0.50±0.05，P=0.014），腹膜血管周細胞覆蓋率較Ad-FLAG組下降（0.21±0.03 vs0.38±0.02，P=0.01）。并且腹膜血管對FITC-BSA（518.99±92.90 vs320.96±17.68，P=0.03）和FITC-dextran（360.19±12.80 vs263.63±31.64，P=0.03）的通透性均較Ad-FLAG組大鼠明顯增加。
　　結(jié)論：
　　1.尿毒癥和葡萄糖

9、透析液能導(dǎo)致腹膜結(jié)構(gòu)和功能改變，包括腹膜血管周細胞覆蓋率下降、腹膜血管通透性增高等。
　　2.尿毒癥和葡萄糖透析液下調(diào)腹膜PDGF蛋白表達，PDGF蛋白表達量與周細胞覆蓋率、血管通透性和腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運均顯著相關(guān)。
　　3.抑制PDGF-B表達可引起腹膜周細胞覆蓋率下降，血管通透性增高，腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運增高。提示PDGF/PDGFR通路可能通過調(diào)控周細胞覆蓋率影響血管通透性，進而參與腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運增高，該通路可能可以作為將來防治腹膜溶