黃管秦艽中總環(huán)烯醚萜苷、龍膽苦苷對IL-1β誘導大鼠軟骨細胞損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、該論文以大鼠軟骨細胞為實驗對象,采用免疫組化、ELISA、RT-PCR、Wester n b lo t等方法,探討甘肅習用藥材黃管秦艽中總環(huán)烯醚萜苷、龍膽苦苷對IL-1β誘導的大鼠軟骨細胞的保護及作用機制;并運用 HPLC-ESI/MSn技術鑒定了總環(huán)烯醚萜類化合物的結構,為黃管秦艽對軟骨細胞的保護及抗炎作用提供物質基礎。本課題首次從分子水平上闡明栽培品種和野生品種黃管秦艽中總環(huán)烯醚萜苷、龍膽苦苷對軟骨細胞的保護及抗炎作用機制,為黃管秦

2、艽的深入開發(fā)與資源替代提供理論依據(jù),為發(fā)現(xiàn)新型抗骨關節(jié)炎藥物奠定基礎。
　　一、采用免疫組化、ELISA、RT-PCR、Western blot等方法,探討黃管秦艽中總環(huán)烯醚萜苷、龍膽苦苷對 IL-1β誘導的大鼠軟骨細胞的保護及作用機制。結果表明:龍膽苦苷、栽培品種總環(huán)烯醚萜苷、野生品種總環(huán)烯醚萜苷均能不同程度地降低 MAPKs信號通路中 JNK、p38、ERK的磷酸化水平,抑制 IL-1β誘導大鼠軟骨細胞中 COX-2、PGE2

3、、MMP-1、MMP-3、MMP-13表達升高、Ⅱ型膠原表達減弱的病理改變。
　　二、對富集純化后的化合物分別進行 HPLC-ESI/MSn分析,結合對照品的保留時間、質譜數(shù)據(jù)及文獻對照等方法,野生品種鑒定出了8個環(huán)烯醚萜類化合物,分別為:落干酸、秦艽苷 A、山梔苷甲酯、6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、dehydropentstemoside。栽培品種鑒定出了6個環(huán)烯醚萜類化合物,分別為胡麻屬苷

4、、落干酸、山梔苷甲酯、6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷。
　　本研究通過龍膽苦苷、栽培品種總環(huán)烯醚萜苷和野生品種總環(huán)烯醚萜苷對IL-1β誘導的大鼠軟骨細胞的影響,發(fā)現(xiàn)龍膽苦苷、栽培品種總環(huán)烯醚萜苷和野生品種總環(huán)烯醚萜苷均能通過抑制了MAPKs途徑中P38、ERK、JNK的磷酸化,降低COX-2的表達,減少PGE2的產生,使MMP-1、MMP-3、MMP-13的表達降低,達到抑制Ⅱ型膠原降解的目的,對軟骨細胞