人類早期卵裂胚胎凍融過程中卵裂球丟失對子代安全性的影響.pdf

1、1984年，人類首例凍融胚胎移植(frozen-thawedembryotransfer，F(xiàn)ET)后的小孩在英國出生。此后，胚胎冷凍技術(shù)迅速發(fā)展，大量人類合子、卵裂期胚胎、囊胚被用于冷凍保存。FET可提高積累妊娠率、降低多胎率，同時預防重度卵巢過度刺激綜合征的發(fā)生，已成為現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)(assistedreproductivetechnology，ART)的一項常規(guī)操作。目前，歐洲國家1-4％的新生兒來自ART，而FET周期數(shù)已占AR

2、T周期數(shù)的20％，F(xiàn)ET子代已成為ART子代不容忽視的重要組成部分。由于ART各項技術(shù)均缺乏實驗室基礎(chǔ)研究及其非自然生殖的特性，ART的安全性一直是大家關(guān)注的焦點，現(xiàn)關(guān)于FET子代的健康研究已有一些報導。研究指出，與新鮮胚胎移植出生的新生兒相比，F(xiàn)ET新生兒的結(jié)局相對令人欣慰，單胎平均出生體重較前者高，早產(chǎn)(pretermbirth，PTB)和低出生體重(lowbirthweight，LBW)的風險有所降低。
　　 在卵裂期胚胎

3、冷凍和解凍過程中，一部分會經(jīng)受住凍融的考驗，卵裂球保持完整；一部分會因細胞溶解或壞死丟失部分卵裂球；還有部分胚胎會在這個過程中退化。由于胚胎早期的卵裂細胞均為干細胞，具有全能性，即使丟失部分卵裂球，胚胎仍有能力發(fā)育成一個完整的個體。目前認為解凍后至少50％的卵裂球保持完整，且具有分裂能力的凍融胚胎適合于移植。卵裂球丟失是卵裂期胚胎凍融過程中的一種常見現(xiàn)象，約50％的冷凍胚胎會發(fā)生不同程度的卵裂球損傷，以往的研究僅關(guān)注于此種現(xiàn)象對胚胎種植

4、潛能的影響。在對人類和小鼠胚胎的研究中均發(fā)現(xiàn)與卵裂球完整的凍融胚胎相比，卵裂球丟失胚胎的種植能力顯著降低。移除了損壞的細胞物質(zhì)后，胚胎的種植率和妊娠率均得到了一定程度的提高。
　　 胚胎植入前階段是其發(fā)育的關(guān)鍵時期，包括基因組的激活、基因印記狀態(tài)的維持、非印記基因第二次去甲基化和甲基化的重建都發(fā)生于此階段。一些動物實驗表明發(fā)生于此期的不良事件，例如胚胎體外培養(yǎng)、卵裂球活檢、胚胎冷凍保存，都會對其后續(xù)的生長發(fā)育產(chǎn)生深遠影響，甚至影

5、響子代成年后的健康。而卵裂球丟失的冷凍胚胎就經(jīng)受了一系列不良事件，除了凍融程序本身導致胚胎細胞的形態(tài)和代謝的改變外，胚胎尚經(jīng)歷了部分物質(zhì)的減少，且損傷細胞釋放的物質(zhì)可能對余下卵裂球產(chǎn)生毒性作用，干擾胚胎的正常種植和發(fā)育。因此，卵裂球丟失現(xiàn)象對FET子代的短期和長期影響不容忽視，但目前尚無此方面的國內(nèi)外文獻報導。
　　 所以，本研究致力于探索人類早期卵裂胚胎凍融過程中卵裂球丟失對FET子代安全性的影響，以卵裂球完整的凍融胚胎移植后

6、出生的子代為對照。先對卵裂球丟失胚胎移植后的妊娠周期的早期妊娠結(jié)局和單胎新生兒結(jié)局進行臨床分析；接著對卵裂球丟失胚胎發(fā)育而來的單胎子代的生長發(fā)育和智力發(fā)育情況進行評估。從而在新生兒和幼年兒童兩個層面系統(tǒng)評估卵裂球丟失胚胎的子代安全性。
　　 第一部分:卵裂球丟失和卵裂球完整的凍融胚胎移植后早期妊娠結(jié)局和單胎新生兒結(jié)局比較
　　 目的：研究人類早期卵裂胚胎凍融過程中卵裂球丟失是否會對早期妊娠結(jié)局和單胎的新生兒結(jié)局產(chǎn)生影響。

7、
　　 對象與方法：回顧性分析2001年1月至2010年4月在我院生殖中心行FET并妊娠的病例，所有移植胚胎均為卵裂球丟失胚胎的周期納入實驗組(n=220)，所有移植胚胎均為卵裂球完整胚胎的周期納入對照組(n=687)。比較兩組之間早期妊娠結(jié)局及活產(chǎn)單胎的新生兒結(jié)局是否存在差異。并進一步分析了影響單胎新生兒出生體重的因素。
　　 結(jié)果：實驗組220例妊娠周期與對照組687例妊娠周期相比，前者生化妊娠率顯著增高(8.6％比

8、4.1％，P=0.008)，出生子代的多胎比率顯著降低(28.2％比48.6％，P<0.001)。校正一些干擾因素的影響后，實驗組125例單胎的平均出生體重顯著低于對照組338例單胎的平均出生體重(3229.6±510.1g比3338.5±473.8g，P=0.014)。但兩組單胎的孕周無顯著差異，實驗組單胎早產(chǎn)兒、低出生體重兒、小于胎齡兒的風險等也未見增高。
　　 結(jié)論：我們的研究進一步證明了卵裂球丟失會降低胚胎的發(fā)育潛能，且

9、影響胚胎的后續(xù)生長發(fā)育，導致單胎子代的較低出生體重。
　　 第二部分:卵裂球丟失和卵裂球完整凍融胚胎發(fā)育而來的單胎子代兒童期生長發(fā)育和智力發(fā)育的比較
　　 目的：
　　 研究人類早期卵裂胚胎凍融過程中卵裂球丟失對單胎子代生長發(fā)育及智力發(fā)育的影響。
　　 對象和方法：
　　 研究對象為2001年8月-2008年8月在我院生殖中心行FET后出生的單胎子代，卵裂球丟失胚胎發(fā)育而來的子代納入實驗組，卵裂球

10、完整胚胎發(fā)育而來的子代納入對照組。通過信件或電話聯(lián)系，動員其父母參加我院的試管嬰兒隨訪工作。測量兒童的身高、體重，以WHO(2006年)新發(fā)布的參考值及評價標準給予體格發(fā)育評估。對于不同年齡的兒童，選擇最適合的測試量表，包括Gesell發(fā)育量表、中國-韋氏幼兒智力量表、中國-韋氏兒童智力量表，計算各自的發(fā)育商或智商，以評估其生長發(fā)育和智力發(fā)育情況。
　　 結(jié)果：
　　 實驗組42個、對照組75個單胎子代參加隨訪，兩組兒童

11、的體格發(fā)育參數(shù)無明顯差異。共22例實驗組單胎和48例對照組單胎進行了Gesell發(fā)育指數(shù)測試，校正父母學歷、是否為低出生體重等干擾因素的影響后，發(fā)現(xiàn)兩組兒童的適應性、精細動作、大運動和語言發(fā)育商均無顯著差異，實驗組子代個人-社交能力顯著低于對照組。共20例實驗組單胎和27例對照組單胎進行了韋氏智力測試，校正上述干擾因素的影響后，兩組兒童的言語智商、操作智商和總智商也無顯著差異。多元線性回歸分析顯示，母親文化水平顯著影響適應性發(fā)育商，父親