可溶性HLA-G二聚體在體外促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬和B細(xì)胞的分化.pdf

1、HLA-G為非經(jīng)典類MHCⅠ類分子，目前普遍認(rèn)為是一種致耐受性免疫分子，研究證實可溶性HLA-G二聚體與抑制性受體的結(jié)合力較單體更強(qiáng)，可以產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫抑制效應(yīng)。HLA-G分子通過直接與殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)結(jié)合，有效地抑制T細(xì)胞增殖，抑制NK細(xì)胞的殺傷功能，抑制DC的抗原遞呈和分泌細(xì)胞因子作用。而HLA-G也可以通過間接作用，誘導(dǎo)T細(xì)胞分化產(chǎn)生抑制性T細(xì)胞，對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生持續(xù)且深遠(yuǎn)的影響。對于機(jī)體的適應(yīng)性免疫中的T細(xì)胞、D

2、C細(xì)胞和固有免疫中的NK細(xì)胞的功能，HLA-G的抑制作用目前研究較多，而且認(rèn)識比較清楚，但是對適應(yīng)性免疫中的B細(xì)胞，HLA-G的作用未見研究，對固有免疫中的巨噬細(xì)胞也鮮有報道。本研究的目的在于觀察可溶性HLA-G二聚體對于巨噬細(xì)胞的吞噬、抗原呈遞和對B細(xì)胞分化為抗體形成細(xì)胞的影響。使用的可溶性HLA-G二聚體由本室的前期構(gòu)建的人sHLA-G二聚體基因質(zhì)粒導(dǎo)入721.221細(xì)胞株制備的。研究內(nèi)容簡述如下：
　　一、可溶性HLA-G二

3、聚體在體外促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬和抗原提呈能力
　　從人外周血分離單個核細(xì)胞，通過貼壁獲得單核/巨噬細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時加入可溶性HLA-G二聚體，并設(shè)置721.221上清組作為對照。加入藻紅蛋白（PE）染色的微球使巨噬細(xì)胞發(fā)生吞噬反應(yīng)，巨噬細(xì)胞吞噬PE微球后被PE染色，流式細(xì)胞儀檢測各組CD14和PE雙陽性細(xì)胞所占比例即巨噬細(xì)胞吞噬率；用CD14、CD40，CD80，CD83，HLA-DR抗體染色后，用流式細(xì)胞儀檢測CD14細(xì)胞表面C

4、D40，CD80，CD83，HLA-DR這些與抗原提呈密切相關(guān)的分子表達(dá)水平，借以了解單核/巨噬細(xì)胞的抗原提呈能力。結(jié)果顯示：與對照組相比，實驗組MΦ吞噬率顯著升高（42.3±17.2 vs49.4±19.9，P=0.0003），具有統(tǒng)計學(xué)意義；與對照組相比，實驗組MΦ表面CD40、CD80、CD83分子陽性率明顯升高（其結(jié)果分別為57.4±20.9vs67.1±14.0,12.3±10.2vs20.1±14.9,23.4±13.1vs

5、28.6±13.0，P分別為0.001、0.005、0.002），而且CD40和HLA-DR分子表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度也有顯著升高（其結(jié)果分別為1374.8±980.2vs1928.4±1416.8，5263.6±2450.9vs8379.6±3155.6，P分別為0.005、0.016），具有統(tǒng)計學(xué)意義。以上結(jié)果顯示可溶性HLA-G二聚體在體外能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬和抗原提呈能力。
　　二、可溶性HLA-G二聚體在體外促進(jìn)B細(xì)胞分化

6、為抗體形成細(xì)胞
　　分離人外周血得到單個核細(xì)胞，以PE作為抗原，貼壁單核/巨噬細(xì)胞吞噬PE微球后作為抗原提呈細(xì)胞，PE微球刺激的懸浮淋巴細(xì)胞作為抗原反應(yīng)細(xì)胞。將抗原提呈細(xì)胞和抗原反應(yīng)細(xì)胞混合后，在體外培養(yǎng)時加入可溶性HLA-G二聚體，并設(shè)置721.221上清組作為對照。第6天收集繼續(xù)加入吞噬PE微球的巨噬細(xì)胞和PE微球進(jìn)行第二次刺激，繼續(xù)培養(yǎng)至第9天。用CD19、CD38抗體染色區(qū)分漿細(xì)胞和其他階段的B細(xì)胞，用PE染色顯示表達(dá)PE

7、特異性BCR的B細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果顯示：與對照組組相比，實驗組在刺激第6天時的CD38+細(xì)胞比率顯著升高（23.7±7.5vs32.0±7.6，P=0.0004），在刺激第9天時表達(dá)PE特異性BCR的B細(xì)胞明顯增加（9.9±2.5vs16.3±3.2，P=0.03）。以上結(jié)果顯示可溶性HLA-G二聚體可以顯著促進(jìn)B細(xì)胞分化為抗體形成細(xì)胞。
　　本研究結(jié)果顯示了可溶性HLA-G二聚體在體外能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬和抗原提呈能力