可溶性HLA-G二聚體在“人-鼠”異種移植物抗宿主病模型中的作用研究.pdf

1、HLA-G是非經(jīng)典的HLAI類(lèi)分子之一,其有限的基因多態(tài)性及限制性的組織分布,提示它是一種誘導(dǎo)免疫耐受的分子。臨床上免疫抑制劑的大量使用,在緩解移植排斥反應(yīng)的同時(shí)也抑制了機(jī)體的免疫系統(tǒng),使患者處于罹患感染的風(fēng)險(xiǎn)之中,因此,誘導(dǎo)同種異體免疫耐受成為了目前亟待解決的問(wèn)題。大量體外研究資料顯示,HLA-G可以通過(guò)與抑制性受體,如ILT-2/4等結(jié)合,誘導(dǎo)T、B、NK、DC、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的免疫耐受。臨床移植研究也顯示,HLA-G陽(yáng)性受者較

2、HLA-G陰性的受者,其急性排斥期短,慢性排斥發(fā)生率也低。研究顯示,HLA-G二聚體在體外能有效抑制同種T細(xì)胞的應(yīng)答作用,但其在體內(nèi)的研究相對(duì)較少。本研究利用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)模型,在體外研究了HLA-G二聚體對(duì)同種反應(yīng)性T細(xì)胞的作用;利用“人-鼠”異種GVHD模型,初步探討了HLA-G二聚體在體內(nèi)的作用;同時(shí)我們還利用“人-鼠”異種GVHD模型,探討了雷帕霉素在該模型中的作用。論文的主要內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　一、可溶性HLA-G二

3、聚體可誘導(dǎo)同種T細(xì)胞耐受
　　為了進(jìn)一步研究可溶性HLA-G二聚體抑制同種反應(yīng)性T細(xì)胞的作用,本研究選用Tyr368-376肽,將其加載至T2細(xì)胞表面,利用加載了Tyr肽的T2細(xì)胞與HLA-A2陰性的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),這個(gè)過(guò)程中加入可溶性HLA-G二聚體進(jìn)行干預(yù),混合培養(yǎng)七天之后收集細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)和分析。結(jié)果顯示:可溶性HLA-G二聚體可抑制T細(xì)胞活化,抑制同種CD8+細(xì)胞分泌IFN-γ,促進(jìn)同種CD8+細(xì)胞分泌

4、IL-4,但對(duì)同種CD8+細(xì)胞分泌TGF-β無(wú)影響。
　　二、可溶性HLA-G二聚體不能改善模型鼠的GVHR癥狀和延長(zhǎng)其生存時(shí)間
　　基于可溶性HLA-G二聚體在體外能誘導(dǎo)同種T細(xì)胞耐受,為了進(jìn)一步豐富可溶性HLA-G二聚體在體內(nèi)相關(guān)數(shù)據(jù),我們建立了“人-鼠”異種GVHD模型,探討其在體內(nèi)的作用。結(jié)果顯示:可溶性HLA-G二聚體不能改善模型鼠的GVHR癥狀,也不能延長(zhǎng)其生存時(shí)間。隨后我們發(fā)現(xiàn)在異種混合培養(yǎng)中,第七天時(shí)CD56

5、+有明顯的增殖,且在加入可溶性HLA-G二聚體之后這一增殖更加明顯,但CD3+和CD14+細(xì)胞沒(méi)有觀(guān)察到明顯增殖;單用CD56+細(xì)胞也不能導(dǎo)致異種GVHR的發(fā)生,但去除PBMC中的CD56+細(xì)胞后,模型鼠的生存時(shí)間得到了顯著延長(zhǎng)。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們可以確定,CD56+細(xì)胞在異種混合培養(yǎng)中起關(guān)鍵作用,是異種GVHR發(fā)生的導(dǎo)火索。
　　三、雷帕霉素改善模型鼠GVHR癥狀伴隨MDSCs的增多
　　mTOR是一種非典型的絲氨酸/

6、蘇氨酸蛋白激酶,為磷脂酰肌醇激酶相關(guān)激酶蛋白質(zhì)家族成員之一,是細(xì)胞生長(zhǎng)及發(fā)育中的一種關(guān)鍵激酶,是雷帕霉素的靶向分子。雷帕霉素是由吸水鏈霉菌生產(chǎn)的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi),最初獲得關(guān)注是其具有免疫抑制作用。在我們的研究中,我們利用“人-鼠”異種GVHD模型以及與GM-CSF聯(lián)用,分別從體內(nèi)和體外對(duì)雷帕霉素進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示:在體內(nèi),雷帕霉素可以改善模型鼠GVHR癥狀并伴隨MDSCs的增多;在體外,雷帕霉素與GM-CSF聯(lián)用,可以誘導(dǎo)PBMC中MDSC