可溶性HLA-G二聚體在“人-鼠”異種移植物抗宿主病模型中的作用研究.pdf

1、HLA-G是非經典的HLAI類分子之一,其有限的基因多態(tài)性及限制性的組織分布,提示它是一種誘導免疫耐受的分子。臨床上免疫抑制劑的大量使用,在緩解移植排斥反應的同時也抑制了機體的免疫系統(tǒng),使患者處于罹患感染的風險之中,因此,誘導同種異體免疫耐受成為了目前亟待解決的問題。大量體外研究資料顯示,HLA-G可以通過與抑制性受體,如ILT-2/4等結合,誘導T、B、NK、DC、巨噬細胞等免疫細胞的免疫耐受。臨床移植研究也顯示,HLA-G陽性受者較

2、HLA-G陰性的受者,其急性排斥期短,慢性排斥發(fā)生率也低。研究顯示,HLA-G二聚體在體外能有效抑制同種T細胞的應答作用,但其在體內的研究相對較少。本研究利用混合淋巴細胞培養(yǎng)模型,在體外研究了HLA-G二聚體對同種反應性T細胞的作用;利用“人-鼠”異種GVHD模型,初步探討了HLA-G二聚體在體內的作用;同時我們還利用“人-鼠”異種GVHD模型,探討了雷帕霉素在該模型中的作用。論文的主要內容與結果如下:
　　一、可溶性HLA-G二

3、聚體可誘導同種T細胞耐受
　　為了進一步研究可溶性HLA-G二聚體抑制同種反應性T細胞的作用,本研究選用Tyr368-376肽,將其加載至T2細胞表面,利用加載了Tyr肽的T2細胞與HLA-A2陰性的淋巴細胞混合培養(yǎng),這個過程中加入可溶性HLA-G二聚體進行干預,混合培養(yǎng)七天之后收集細胞,通過流式細胞學技術進行檢測和分析。結果顯示:可溶性HLA-G二聚體可抑制T細胞活化,抑制同種CD8+細胞分泌IFN-γ,促進同種CD8+細胞分泌

4、IL-4,但對同種CD8+細胞分泌TGF-β無影響。
　　二、可溶性HLA-G二聚體不能改善模型鼠的GVHR癥狀和延長其生存時間
　　基于可溶性HLA-G二聚體在體外能誘導同種T細胞耐受,為了進一步豐富可溶性HLA-G二聚體在體內相關數據,我們建立了“人-鼠”異種GVHD模型,探討其在體內的作用。結果顯示:可溶性HLA-G二聚體不能改善模型鼠的GVHR癥狀,也不能延長其生存時間。隨后我們發(fā)現在異種混合培養(yǎng)中,第七天時CD56

5、+有明顯的增殖,且在加入可溶性HLA-G二聚體之后這一增殖更加明顯,但CD3+和CD14+細胞沒有觀察到明顯增殖;單用CD56+細胞也不能導致異種GVHR的發(fā)生,但去除PBMC中的CD56+細胞后,模型鼠的生存時間得到了顯著延長。綜合上述實驗結果,我們可以確定,CD56+細胞在異種混合培養(yǎng)中起關鍵作用,是異種GVHR發(fā)生的導火索。
　　三、雷帕霉素改善模型鼠GVHR癥狀伴隨MDSCs的增多
　　mTOR是一種非典型的絲氨酸/

6、蘇氨酸蛋白激酶,為磷脂酰肌醇激酶相關激酶蛋白質家族成員之一,是細胞生長及發(fā)育中的一種關鍵激酶,是雷帕霉素的靶向分子。雷帕霉素是由吸水鏈霉菌生產的大環(huán)內酯類,最初獲得關注是其具有免疫抑制作用。在我們的研究中,我們利用“人-鼠”異種GVHD模型以及與GM-CSF聯用,分別從體內和體外對雷帕霉素進行了研究。結果顯示:在體內,雷帕霉素可以改善模型鼠GVHR癥狀并伴隨MDSCs的增多;在體外,雷帕霉素與GM-CSF聯用,可以誘導PBMC中MDSC