供者CD56+細胞加速人-鼠異種移植物抗宿主病的發(fā)生及機制探索.pdf

1、移植物抗宿主?。℅raft-versus-Host Disease，GVHD）是造血干細胞移植后出現(xiàn)的多系統(tǒng)（如胃腸、皮膚、肝臟等）損害的全身性疾病，是造成移植后死亡的原因之一。CD56是一種神經(jīng)細胞粘附分子，其在外周血中主要表達于NK細胞（CD3-CD56+）及包括NKT細胞在內(nèi)的固有免疫樣T細胞（CD3+CD56+）表面。有研究提出，在同種異基因造血細胞移植過程中，外周血CD3-CD56+NK細胞在GVHD的發(fā)生中具有保護作用。近年

2、研究提示異種移植的可行性增高并且需求增強，但對于異種GVHD的發(fā)生機制及CD56+細胞在異種GVHD中的作用卻少有研究。本研究的目的是在體內(nèi)及體外探索供者CD56+細胞對異種GVHD的作用。
　　本論文主要內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　一、去除供者CD56+細胞可以延長異種GVHD模型小鼠生存時間
　　本研究中，我們過繼人外周血單個核細胞（PBMC）到NOD/SCID免疫缺陷小鼠體內(nèi)，建立了“人-鼠”異種GVHD模型，發(fā)病小鼠

3、存活時間平均為14天左右。然而將供者CD56+細胞分選后過繼給小鼠，盡管可引起移植小鼠的體重下降，但是并不能導(dǎo)致致死性異種GVHD的發(fā)生。而去除CD56+細胞的外周血PBMC過繼給小鼠后，小鼠生存時間顯著延長，平均30天左右。該部分結(jié)果提示CD56+細胞并不能直接介導(dǎo)致死性異種GVHD的發(fā)生，但是能夠加速異種GVHD的發(fā)生。
　　二、異種細胞可刺激外周血CD56+細胞明顯增殖并活化
　　應(yīng)用人源性THP-1細胞、小鼠源性J5

4、58L細胞作為刺激細胞，與分選的人CD56+細胞在體外共培養(yǎng)，分別建立CD56+細胞的同種異體刺激組、異種刺激組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異種刺激組中CD56+細胞增殖強度明顯高于同種異體刺激組。同時異種刺激組中CD56+細胞表面活化分子CD69、CD25上調(diào)明顯高于同種異體刺激組。并且CD3-CD56+及CD3+CD56+細胞均發(fā)生增殖與活化。
　　三、異種細胞可刺激CD56+細胞分泌促炎性細胞因子增多
　　收集同種異體刺激組、異種刺激

5、組的培養(yǎng)上清。通過CBA及ELISA檢測了培養(yǎng)上清中Th1/Th2/Th17型細胞因子濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與同種異體刺激組相比，異種刺激組上清中，IL-1β、TNF、IFN-γ濃度顯著上升。
　　四、與異種細胞共培養(yǎng)后，CD56+細胞殺傷活性降低
　　收集經(jīng)過小鼠源性J558L細胞刺激的人CD56+細胞，檢測其對不同來源細胞的殺傷活性。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過小鼠源性J558L細胞刺激后，CD56+細胞對小鼠來源細胞（J558L與Yac-

6、1細胞）及對于人來源細胞（THP-1、T1及K562細胞）殺傷活性均降低。
　　五、在CD56+細胞存在下，異種細胞可刺激人CD8+T細胞增殖及CD4+和CD8+T細胞的活化
　　應(yīng)用人源性THP-1細胞、小鼠源性J558L細胞作為刺激細胞，與分選T細胞在體外共培養(yǎng)，分別建立T細胞的同種異體刺激組、異種刺激組。在共培養(yǎng)體系中加入與T細胞同一個體來源的CD56+細胞，觀察在CD56+細胞存在與否的條件下，T細胞接受同種細胞及異

7、種細胞刺激后的增殖與活化的情況。結(jié)果顯示，經(jīng)過5天共培養(yǎng)后，在沒有CD56+細胞存在下，同種異體刺激組與異種刺激組中的T細胞的增殖與活化程度較低；然而在CD56+細胞存在下，異種刺激組中CD8+T細胞的增殖及CD4+和CD8+T細胞的活化明顯增強，而CD56+細胞存在不影響同種異體刺激組T細胞的增殖與活化。結(jié)果顯示CD56+細胞選擇性的增強在異種抗原刺激下T細胞的增殖與活化。
　　綜上所述，CD56+細胞盡管不是直接介導(dǎo)異種GVH