復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞WNT信號(hào)通路的影響.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩80頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),建立大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的體外培養(yǎng)體系;通過(guò)觀察復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖過(guò)程中WNT信號(hào)通路的調(diào)控作用,闡明復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)BMSCs增值作用的機(jī)理,探索中藥復(fù)方抗衰老的新途徑。
   方法:1.運(yùn)用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)純化BMSCs,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)觀察不同階段細(xì)胞生長(zhǎng)特征。2.通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)BMSCs

2、的活性。3.MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線檢測(cè)BMSCs的增殖活性。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs表面抗原標(biāo)志和細(xì)胞周期。5.在成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)下觀察BMSCs向成骨細(xì)胞分化能力。6.將30只SD大鼠隨機(jī)分為二組,每組15只,分別為復(fù)方扶芳藤合劑灌胃的藥物干預(yù)組和生理鹽水灌胃的陰性對(duì)照組;取灌胃后10%藥物血清及陰性對(duì)照組的血清分別對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),運(yùn)用MTT法檢測(cè)復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)大鼠BMSCs增殖的影響。7.通過(guò)RT-PCR檢測(cè)Wnt

3、3a、β-catenin、c-myc的mRNA表達(dá)水平在干預(yù)前后的表達(dá)變化。8.通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Wnt3a、β-catenin、c-myc的蛋白在干預(yù)前后的表達(dá)變化。
   結(jié)果:1.顯微鏡下觀察貼壁生長(zhǎng)的BMSCs形態(tài)呈長(zhǎng)梭形,呈融合成放射狀或旋渦狀,均勻一致。2.通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)BMSCs的活性率為98.7%。3.BMSCs生長(zhǎng)曲線分析結(jié)果顯示接種后第3天細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期,至第7天進(jìn)入平臺(tái)期。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)

4、BMSCs細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示G0/G1期的細(xì)胞約占88.45%。顯示BMSCs均一地表達(dá)細(xì)胞表面抗原CD44、CD90、CD105,陽(yáng)性率分別為99.32%,99.33%,99.36%;而CD34呈陰性,陽(yáng)性率為1.45%。5.經(jīng)成骨誘導(dǎo)液定向誘導(dǎo)分化后,細(xì)胞呈現(xiàn)成骨細(xì)胞的表型特征。6與生理鹽水陰性對(duì)照組相比,復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可明顯促進(jìn)BMSCs增殖(P<0.05)。7.RT-PCR顯示藥物干預(yù)組Wnt3a、β-catenin、

5、c-myc的mRNA表達(dá)水平均高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。8.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示藥物干預(yù)組Wnt3a、β-catenin、c-myc蛋白表達(dá)均高于陰性對(duì)照組(P<0.01)。
   結(jié)論:1.采用全骨髓貼壁法可獲得純度高、活性好的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,建立了穩(wěn)定培養(yǎng)體系,為我們對(duì)干細(xì)胞研究提供可靠的細(xì)胞來(lái)源。2.復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可促進(jìn)BMSCs的增殖;在BMSCs增值過(guò)程中,復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可以使Wnt3a、β-c

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論