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1、目的:探究β-catenin/Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在人骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中的調(diào)控作用。
方法:首先分離、培養(yǎng)、并鑒定人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,測(cè)定其標(biāo)志物及多向分化潛能。其次應(yīng)用鋰劑、GSK-3β抑制劑 SB216763、槲皮素(Quercetin)及慢病毒介導(dǎo)的beta-catenin siRNA轉(zhuǎn)染,正負(fù)向調(diào)β-catenin/Wnt信號(hào)通路活性,采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖速度。
結(jié)果:采用經(jīng)典方法培養(yǎng)出的人源性
2、間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)鑒定確認(rèn)其特異性標(biāo)記物,如 CD29(95±3.7%),CD44(91±2.1%),CD73(98±1.4%),CD90(98±2.3%),CD105(76±6.2%)。經(jīng)分化后可誘導(dǎo)為成熟的脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞,證明其具有多向分化潛能。通過小分子藥物氯化鋰或者SB216763抑制GSK3β蛋白從而激活β-catenin/Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可有效促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖。該效應(yīng)呈劑量相關(guān)性,5mM氯化鋰組可提高細(xì)胞總
3、數(shù)至對(duì)照組的1.4倍,SB216763(50μM)可提高細(xì)胞總數(shù)至1.6倍。相反,β-catenin/Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路小分子抑制劑槲皮素可明顯抑制MSC的增殖,慢病毒介導(dǎo)的β-catenin蛋白干擾也發(fā)揮了相似的效用。
結(jié)論:β-catenin/Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)控人源性間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中發(fā)揮了重要的作用。通過小分子藥物調(diào)控β-catenin/Wnt通路可有效調(diào)控MSCs的增殖。該發(fā)現(xiàn)可為β-catenin/Wnt通路相
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