復方扶芳藤合劑對大鼠骨髓間充質干細胞增殖的影響及其機理的探討.pdf

1、目的：通過觀察復方扶芳藤合劑含藥血清對大鼠骨髓間充質干細胞增殖過程中Notch信號通路的調控作用，闡明復方扶芳藤合劑促進BMSCs增殖的作用機理，試述復方中藥抗衰老的科學內涵。
　　方法：(1)采用體外細胞培養(yǎng)技術，建立穩(wěn)定的大鼠骨髓間充質干細胞培養(yǎng)體系，通過細胞形態(tài)觀察不同階段細胞生長特征；(2)MTT法繪制細胞生長曲線；流式細胞儀檢測細胞周期、表面標志；向成骨方向行誘導分化；對BMSCs進行鑒定；(3)將30只雄性SD大鼠隨機

2、分為二組，每組15只，分別為復方扶芳藤合劑灌胃的藥物干預組和生理鹽水灌胃的陰性對照組；取灌胃后10%藥物血清及陰性對照組的血清分別對骨髓間充質干細胞進行干預，采用MTT法檢測復方扶芳藤合劑對體外培養(yǎng)的大鼠BMSCs增殖的影響；(4)通過RT-PCR檢測Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表達水平在干預前后的表達變化；(5)通過免疫細胞化學方法檢測Notch1、Jagged1的蛋白在干預前后的表達變化。
　　結果：(1)

3、顯微鏡下觀察全骨髓貼壁法分離純化培養(yǎng)的 BMSCs以梭形為主，呈放射狀排列的細胞集落，細胞生長旺盛；(2)細胞生長曲線呈S形，細胞生長周期為7d。流式細胞儀檢測細胞周期示 BMSCs處于G0/G1期的細胞為82.7%，BMSCs均一地表達細胞表面分子抗原CD44、CD90，陽性率分別為，99.4%、99.7%，而CD45呈陰性，陽性率為0.21%。堿性磷酸酶（ALP）染色、茜素紅染色呈陽性。檢測顯示其符合正常間充質干細胞生長特征且生長活

4、躍；(3)MTT結果顯示與生理鹽水陰性對照組相比，復方扶芳藤合劑含藥血清可明顯促進 BMSCs增殖（P<0.05）；(4)RT-PCR結果顯示藥物干預組Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表達水平均高于陰性對照組（P<0.05）；(5)免疫細胞化學結果顯示藥物干預組Notch1、Jagged1蛋白表達均高于陰性對照組（P<0.05）。
　　結論：(1)復方扶芳藤合劑含藥血清可促進BMSCs的增殖；(2)在復方扶芳藤合劑