復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響研究.pdf

1、目的：觀察復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)增殖的影響，并探討其分子機(jī)制。
　　方法：1.分別采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁法分離4周齡SPF級(jí)SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性：進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察（光鏡）；細(xì)胞活性檢測(cè)；對(duì)第2，3，4，5，6代MSCs應(yīng)用MTT法測(cè)定生長(zhǎng)曲線，分析MSCs的生長(zhǎng)規(guī)律；細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇。通過誘導(dǎo)使M

2、SCs分化為成骨細(xì)胞（von Kossa染色法）；免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)細(xì)胞層粘連蛋白表達(dá)；2.將250g左右SD雄性大鼠隨機(jī)分為復(fù)方扶芳藤合劑灌胃組和生理鹽水灌胃組，制備血清。用2組血清干預(yù)MSCs的生長(zhǎng)，MTT法檢測(cè)兩組血清對(duì)MSCs增殖的影響。RT-PCR法檢測(cè)兩組血清對(duì)Notch1基因表達(dá)的影響；Western blot法檢測(cè)兩組血清對(duì)NOTCH1蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.原代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種24小時(shí)后開始

3、貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為均勻成梭形，并由最初典型的集落生長(zhǎng)，逐漸融合成片，呈放射狀或漩渦狀生長(zhǎng)，符合MSCs生長(zhǎng)的特性。采用全骨髓貼壁法分離的原代MSCs，生長(zhǎng)增殖迅速，10-14天MSCs融合接近80％，傳代培養(yǎng)生長(zhǎng)良好；而采用密度梯度離心法分離的MSCs，生長(zhǎng)增殖較慢，17-20天MSCs融合才接近80%；2. MSCs生長(zhǎng)曲線呈S型，由生長(zhǎng)曲線分析可知，傳代的MSCs在培養(yǎng)第3-7天為高速生長(zhǎng)期，MSCs在第3-6代生長(zhǎng)旺盛；3.免疫細(xì)胞

4、化學(xué)染色顯示所培養(yǎng)的細(xì)胞層粘連蛋白表達(dá)呈陰性，von Kossa染色后細(xì)胞表現(xiàn)為黑色的致密結(jié)節(jié)，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；4.與生理鹽水對(duì)照組相比，復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進(jìn)MSCs的增殖（P<0.05）；5.與生理鹽水對(duì)照組相比，復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進(jìn) Notch1基因的表達(dá)（P<0.05）；6.與生理鹽水對(duì)照組相比，復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進(jìn)NOTCH1蛋白的表達(dá)（P<0.05）。
　　結(jié)論