Asn291Ser和Lys312insC聯(lián)合突變脂蛋白脂酶功能的研究.pdf

1、目的：脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)是脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵酶，該酶活性的改變能夠引起并加速肥胖、高血壓、動脈粥樣硬化及糖尿病等疾病的進程，因此對LPL基因功能的研究具有重要意義。本實驗通過野生型（c57）小鼠及LPL基因敲除雜合子（LPL+/-）小鼠體內(nèi)實驗，探討LPL對小鼠體重、脂肪及血脂及組織脂質(zhì)等方面的影響，同時探討新發(fā)現(xiàn)的Asn291Ser和Lys312insC聯(lián)合突變（Asn291Ser+Lys312in

2、sC）LPL的功能。 方法：1）首先制備Asn291Ser+Lys312insC聯(lián)合突變LPL蛋白，然后將純化后的突變型LPL蛋白免疫新西蘭大白兔，制備其多克隆抗體；2）對LPL+/-小鼠和c57小鼠行基因型及表型鑒定后，Real-Time PCR分析小鼠組織LPL mRNA的表達，Western blotting分析小鼠組織蛋白的表達；3）LPL+/-小鼠隨機分為兩組，每組6只，取Asn291Ser+Lys312insC LP

3、L蛋白和野生型LPL蛋白經(jīng)由小鼠尾靜脈注射，內(nèi)眥靜脈采血，比較兩組之間的血脂和LPL活性的差別。 結(jié)果：1）純化出可用于小鼠體內(nèi)注射的LPL蛋白，用Western印跡的方法檢測多抗血清，發(fā)現(xiàn)該多抗靈敏度高，特異性也較好；2）小鼠表型鑒定發(fā)現(xiàn)LPL+/-小鼠甘油三酯(Triglyeride，TG)、游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)及體重(Weigh

4、t)均較c57小鼠高(p<0.05)，Real-Time PCR顯示LPL+/-小鼠肝臟、骨骼肌及脂肪組織LPL mRNA表達較c57顯著降低（p<0.01），western blotting進一步顯示LPL+/-小鼠各組織LPL蛋白表達較c57小鼠低；3）LPL+/-小鼠隨機分組后，注射Asn291Ser+Lys312insC LPL蛋白血脂及LPL活性變化不明顯，而注射野生型LPL后小鼠FFA、TG顯著降低(p<0.05)。