大腦脂蛋白脂酶的蛋白表達(dá)及酶活性在大鼠急性腦缺血-再灌注中的變化.pdf

1、脂蛋白脂酶 (Ifipoprotein lipase，LPL) 是甘油三酯分解代謝的關(guān)鍵酶，具有脂酶活性和分子橋作用，廣泛分布于全身多個(gè)組織。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明，在動(dòng)物腦梗死、腦損傷和周圍神經(jīng)受損的情況下，損傷組織周圍的LPL mRNA、蛋白及酶活性出現(xiàn)上調(diào)，某些伴L(zhǎng)PL活性下降的疾病亦可致神經(jīng)病變，提示LPL在神經(jīng)系統(tǒng)中可能具有重要作用，有學(xué)者推測(cè)LPL是通過(guò)促進(jìn)殘余脂質(zhì)的循環(huán)再利用，從而在腦損傷過(guò)程中發(fā)揮積極作用，但是尚未見(jiàn)有關(guān)于大

2、腦LPL蛋白及酶活性的變化對(duì)急性腦缺血一再灌注的作用的相關(guān)研究。為了解LPL在大腦中的蛋白表達(dá)和酶活性以及兩者在急性腦缺血一再灌注后不同時(shí)點(diǎn)的變化規(guī)律，本研究以線栓法建立SD大鼠的一側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞 (middle cerebral arteryocclusion．MCAO)急性缺血一再灌注模型，通過(guò)對(duì)腦組織的紅四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)染色、細(xì)胞化學(xué)染色、LPL免疫組織化學(xué)

3、反應(yīng)及LPL酶活性的檢測(cè)等方法，觀察在正常情況下LPL蛋白在大腦中的表達(dá)部位、LPL酶活性，以及在急性腦缺血一再灌注后不同缺血時(shí)間點(diǎn)大腦LPL蛋白表達(dá)的部位和數(shù)量、LPL酶活性的變化情況，探討大腦LPL在急性腦缺血－再灌注中的作用及可能的影響機(jī)制。 材料和方法： 選取年齡為20～25周、體重為280～400克的雄性SD大鼠，共82只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(control)、假手術(shù)組(sham)、缺血2小時(shí)組(Is2h)、缺

4、血4小時(shí)組(Is4h)、缺血6小時(shí)組(Is6h)、缺血12小時(shí)組(Is12h)、缺血24小時(shí)組(Is24h)、缺血2小時(shí)再灌注2小時(shí)組(Is2hRe2h)和缺血4小時(shí)再灌注2小時(shí)組(Is4hRe2h)，共9個(gè)組。缺血組采用改良的Longa法建立右側(cè)MCAO短暫腦缺血－再灌注模型，缺血再灌注組分別在缺血2小時(shí)、缺血4小時(shí)后拔出部分栓線(約1厘米)行再灌注2小時(shí)，缺血組的動(dòng)物不拔栓線，假手術(shù)組予結(jié)扎右側(cè)頸外動(dòng)脈，不插栓線。術(shù)中予觀察大鼠的術(shù)

5、前、術(shù)中和術(shù)后體溫、術(shù)前及術(shù)后血糖等生理指標(biāo)。在處死大鼠前對(duì)其神經(jīng)體征做神經(jīng)功能缺損評(píng)分(采用Longa5分法)，然后按每組的規(guī)定時(shí)間處死大鼠，每組各取三只分別做新鮮腦組織TTC染色、用酶標(biāo)儀檢測(cè)新鮮腦組織LPL酶活性，另外三只行冰凍切片，用作尼氏(Nissle)染色、蘇木素－伊紅(HE)染色以及檢測(cè)LPL蛋白免疫組織化學(xué)反應(yīng)。 結(jié)果： 1．9個(gè)組的大鼠體重，術(shù)前、術(shù)后血糖，術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后體溫差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

6、.05)。 2．不同時(shí)間缺血各組之間的腦梗死體積百分比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Is24h組腦梗死體積百分比比Is2h、Is4h組明顯增大(P<0.01，P<0.05)，其余各組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Is4hRe2h組腦梗死體積百分比明顯大于Is2Re2h組(P<0.01)。腦梗死體積百分比越大，神經(jīng)功能缺損評(píng)分越高，兩者呈正相關(guān)(r=0.947，P<0.001)。缺血各組之間的神經(jīng)功能缺損評(píng)分差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P<0.01)。 3．在正常的大鼠中，LPL免疫組化反應(yīng)顯示皮層、海馬及紋狀體都分布有豐富的LPL蛋白。皮層、海馬區(qū)域LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯多于紋狀體區(qū)域(P<0.001，P<0.05)，皮層、海馬區(qū)域LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。毛細(xì)血管內(nèi)皮亦有表達(dá)LPL蛋白。 4．Is4h、Is6h、Isl2h組病灶側(cè)的皮層LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于正常對(duì)照組(P<0.01)；而Is2h、

8、Is24h組與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。缺血再灌注組病灶側(cè)皮層LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于正常對(duì)照組(P<0.05)。Is2hRe2h、Is4hRe2h組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Is2hRe2h組病灶側(cè)LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于Is2h組(t=4.745，P=0.009)，Is4h與Is4hRe2h組之間LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。病灶側(cè)的皮層LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)

9、胞計(jì)數(shù)與缺血時(shí)間呈正相關(guān)(r=0.650，P<0.05)，從缺血4小時(shí)開(kāi)始升高，缺血6小時(shí)達(dá)高峰，維持到缺血12小時(shí)后逐漸下降，缺血24小時(shí)回復(fù)至正常水平。 5．除Is2h組外，其余缺血組兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值均高于正常對(duì)照組(P<0.05)。不同時(shí)間缺血各組之間的兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Is2hRe2h、Is4hRe2h組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Is2h與Is2hRe2h組、Is4h與I

10、s4hRe2h組之間LPL酶活性比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值與缺血時(shí)間呈正相關(guān)(r=0.704，P<0.001)。從缺血4小時(shí)開(kāi)始升高，缺血6小時(shí)升高最明顯，隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)酶活性逐漸下降，缺血24小時(shí)逐漸平穩(wěn)，但仍高于正常水平。 6．病灶側(cè)大腦皮層LPL蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.398，P<0.05)。兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值與神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.

11、609，P<0.01)。 結(jié)論： 1．正常情況下，大腦LPL蛋白主要分布于大腦皮層、海馬，其次為紋狀體。神經(jīng)細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮均有LPL蛋白的表達(dá)。 2．腦缺血后病灶側(cè)大腦LPL蛋白表達(dá)增多，主要位于梗死病灶的皮層周邊區(qū)，隨缺血時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。缺血再灌注后病灶側(cè)大腦LPL蛋白表達(dá)增多3．腦缺血后病灶側(cè)LPL酶活性升高，隨缺血時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。缺血再灌注后病灶側(cè)LPL酶活性也升高。 4．腦缺血早期