應(yīng)用微陣列技術(shù)研究腦卒中患者血漿中microRNA的差異表達(dá)譜.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)碩士學(xué)位論文應(yīng)用微陣列技術(shù)研究腦卒中患者血漿中microRNA的差異表達(dá)譜StudyonthePlasmaMicroRNAExpressionProfileintheAcuteStrokePatientsbyUsingMicroRNAArray課題來源：2014年廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(Iao20006餅)≯坤丁叫ooioO學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院售辯囊匏會(huì)至昂錛霧菇參豸矗李武莢譚盛神經(jīng)病學(xué)學(xué)

2、術(shù)型碩士研究生南方醫(yī)科大學(xué)珠江IK院南酶教授兩厭痞教梭袈啐教授橢酬教授畝I琺馴教硬2014年O3月14目廣州摘要預(yù)后的血液生物標(biāo)記物，如蛋白相關(guān)指標(biāo)Lp—PLA2、S100B、MMPs、ADMA、GFAP等。所以，從分子生物學(xué)角度尋找腦卒中的分子標(biāo)記物，揭示腦卒中的發(fā)病機(jī)理，可為及早發(fā)現(xiàn)腦卒中的危險(xiǎn)人群、預(yù)防腦卒中的發(fā)生提供幫助。對腦卒中有效預(yù)防和發(fā)病機(jī)制的研究符合我國逐步進(jìn)入老齡化社會(huì)的國情，極具中國特色。近年，隨著循環(huán)中微小RNA(

3、MicroRNA，miRNA)發(fā)現(xiàn)，其作為以血漿為基礎(chǔ)的生物標(biāo)志物的有效性被越來越多的證據(jù)所驗(yàn)證。miRNA通過對靶mRNA的降解或翻譯抑制來介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后基因沉默，參與蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)，在神經(jīng)系統(tǒng)分化、發(fā)育以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展等過程中發(fā)揮重要的作用。目前，此類新穎的疾病分子生物標(biāo)志物在腫瘤研究領(lǐng)域已經(jīng)開展，但關(guān)于miRNA參與腦血管病調(diào)控的研究剛剛起步，許多miRNAs在腦梗死、腦出血發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其機(jī)制尚不明確。至今尚缺乏

4、關(guān)于急性腦梗死和腦出血患者血漿中miRNA表達(dá)譜及其變化的研究報(bào)道。因此，從分子基因水平上去闡述腦梗死和腦出血的不同發(fā)病機(jī)理，尋找高敏感、高特異的分子標(biāo)志物用于腦血管疾病的早期無創(chuàng)診斷和建立預(yù)警機(jī)制是目前國際腦血管病研究的熱點(diǎn)。miRNA芯片檢測能對生物樣品中的miRNA進(jìn)行高通量分析，能夠高靈敏，高特異性的檢測miRNA的表達(dá)譜，可以廣泛應(yīng)用于疾病差異性miRNAs表達(dá)譜的初篩。但同時(shí)由于miRNA芯片價(jià)格較昂貴，目前對基因芯片的研究

5、方法多采用二階段方法：一階段主要是通過在小樣本中進(jìn)行芯片的高通量篩選；二階段是將篩選的特異性miRNAs再采用RTPCR進(jìn)行大樣本的臨床驗(yàn)證。本研究主要內(nèi)容包括兩部分：第一部分，包括腦梗死、腦出血患者血漿的采集和儲(chǔ)存；采用Norgen血漿外泌體RNA提取試劑提取血漿總RNA；通過定量PCR進(jìn)行質(zhì)量和濃度檢測；將提取的RNA進(jìn)行標(biāo)記；采用uParaflor’”microRNA微陣列芯片對提取標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交，雜交結(jié)果掃描后，將得到的m