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文檔簡介
1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文利用微陣列技術(shù)研究豬卵泡發(fā)育相關(guān)基因的差異表達(dá)姓名:師科榮申請學(xué)位級別:博士專業(yè):動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師:吳常信李寧20060601ABSTRACTInordcrtoresearchmoleculardevelopmentalmechanismsofmammalianovarianfollicle,porcineovarianfollicleswereselectedasrepresentativeresea
2、rchtargetsTheobjectiveofthestudywastofindovarianfolliclesdevelopmentrelatedgenesbyclarifyingtheexpressionprofilesofdifferentdevelopmentalstagefolliclesTheattentionsofthestudywerefixedonthreekindsofrepresentativeovarianfo
3、lliclesinthewholefollicledevelopmentprocessTheywereprimordialfollicles(namedasP),middledevelopmentalstagefollicles(specialtoPre—antralfollicles,namedasM)andlastdevelopmentalstagefollicles(specialtoLargeantralfollicles,na
4、medasL)Afterbeingisolatedfromovariesofprepubertalgilt,RNAprobesderivedfromextractedRNAwerehybridizedwithcommercialoligomicroarrays,andafteraseriesofdataanalysis,weobtainedthedifferentiallyexpressedgenesthatrelatedtothede
5、velopmentofovarianfolliclesResultsonbothfolliclesisolationandgenesrelatedtoovarianfollicledevelopmentwereasfollows:(1)Basedonthepreviousmethods,thestudyimprovedtheyieldofprimordialfolliclesbymeansofincreasingthelayernumb
6、ersaftercentrifugationinPercollgradientsTheisolatedprimordialfolliclesfromaprepubertalovarywereimprovedfrom185x10’21x105to779x105Andimmunoinfluenrenceanalysisshowedthataveragely9831%O73%ofcellsthatwithrelativelylargersiz
7、einfollicularseparationswasprimordialfolliclesSo,notonlyhigh—yieldedbuthighlypurifedprimordialfolliclescouldbeisolatedbyusingthemethodadvancedinthestudy(2)TheGiemsaandHoechst33342stainingmethodcouldbeusedtodistinguishpri
8、mordialfolliclesfromcontaminatedsomaticcellsAndespeciallytheMaY2couldbedevelopedasarecognizingmarkerofprimordialfoLLiclesbecauseofitsprecisionandeKactness(3)Becauseofsomanyconnectivetissuesinporcineovarymechanicalmethods
9、suchasmicro—dissectionorcuttingmethod,weremoresuitableforisolatingpre—antralfollicles(1004009m)thanothercomb—scrapeandenzymaticmethodThelatertwomethodshadlowerfollicleyieldf2~4folliclesperovary)andquality(4)Thegenomescal
10、edexpressionprofileofP(primordialfollicles)wasgreatlydiffi!rentfromthatoftheothertwokindsoffollicles(MandL)Andthelatertwodevelopmentalstagefollicleswerehighlycorrelatedeachotherwiththebiologicalcorrelationcoefficient(R2)
11、ofO892Allthefeaturesofexpressionpattemsshowedthatagreatmechanismregulatedtheprimordialfolliclepoolkeepquiescentintheovaryandadeepandwideinternalchangeresultedininitiationtheprimordialfolliclesintogrowth(5)Somedistributio
12、ncharacteristicsofdifferentiallyexpressedgenessuggestedthatovarianfolliclesinitiatedinaphysiologicalcyclecouldgrowintolargeantralfolliclesinageneralsalTleregulationpatIem,onlywithsomesubtlemetabolismpathwaysindifferentde
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