κ-卡拉膠寡糖及其衍生物的制備與抗皰疹病毒活性研究.pdf

1、本文針對(duì)抗單純皰疹病毒藥物毒性相對(duì)較大、容易產(chǎn)生耐藥株的缺點(diǎn)，以及硫酸多糖的廣譜抗病毒活性，利用酶降解方法降解k-卡拉膠，制得k-卡拉膠寡糖。使用不同的磺化方法和脫硫酸基方法修飾k-卡拉膠寡糖，分別得到k-卡拉膠寡糖磺化衍生物和k-卡拉膠寡糖脫硫酸基衍生物。利用單純皰疹病毒HSV-1研究k-卡拉膠寡糖及其衍生物的抗病毒活性，同時(shí)研究了它們的抗凝血活性。從而篩選出具有較高抗單純皰疹病毒的k-卡拉膠寡糖衍生物。主要結(jié)果如下： 1、利

2、用MCA-2菌株產(chǎn)生的酶降解k-卡拉膠，可以專一、高效的得到k-卡拉膠酶解片段，使用乙醇分級(jí)、Bio-Gel P-4凝膠過(guò)濾介質(zhì)純化后，得到不同分子量的k-卡拉膠寡糖。通過(guò)IR和化學(xué)方法分析，證明酶解法不會(huì)改變k-卡拉膠的結(jié)構(gòu)。 2、以k-卡拉膠寡糖為原料，采用不同試劑組合、不同反應(yīng)溫度和不同反應(yīng)時(shí)間為變量，研究最佳的制備k-卡拉膠寡糖磺化衍生物和k-卡拉膠寡糖脫硫酸基衍生物的方法。 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，影響k-卡拉膠寡糖磺化衍生

3、物制備的最重要的因素是反應(yīng)溫度，其次是反應(yīng)時(shí)間，最后是試劑組合；而最能影響k-卡拉膠寡糖脫硫酸基衍生物制備的因素也是反應(yīng)溫度，其次是試劑組合，最后是反應(yīng)時(shí)間。 k-卡拉膠寡糖磺化衍生物的最佳制備方法為使用氯磺酸-甲酰胺試劑組合，反應(yīng)溫度為70℃，反應(yīng)時(shí)間為6h；k-卡拉膠寡糖脫硫酸基衍生物的最佳制備方法為使用無(wú)水二甲基亞砜-吡啶-1，2，4，5-苯四酸-氟化鈉試劑組合，反應(yīng)溫度為100℃，反應(yīng)時(shí)間為4h。 3、利用單純

4、皰疹病毒HSV-1和Vero細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，將不同劑量的卡拉膠寡糖及其衍生物分別作用于病毒增殖的不同周期，共研究了卡拉膠寡糖及其衍生物對(duì)病毒的直接作用、對(duì)病毒吸附細(xì)胞的抑制作用和對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用三個(gè)作用階段。初步研究了k-卡拉膠寡糖及其衍生物的抗病毒活性及抗皰疹病毒的機(jī)理。 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，k-卡拉膠寡糖及其衍生物對(duì)Vero細(xì)胞毒性極低。k-卡拉膠寡糖及其磺化衍生物對(duì)單純皰疹病毒HSV-1有抑制作用，主要體現(xiàn)在抑制病毒吸附細(xì)胞的

5、這一步驟；在相同濃度下，k-卡拉膠寡糖磺化衍生物的抑制病毒吸附細(xì)胞作用明顯強(qiáng)于k-卡拉膠寡糖。同時(shí)，對(duì)k-卡拉膠寡糖或其磺化衍生物而言，同一種寡糖對(duì)病毒吸附細(xì)胞的抑制作用隨寡糖濃度的增加而增加。而k-卡拉膠寡糖脫硫酸基衍生物對(duì)單純皰疹病毒HSV-1無(wú)明顯作用。 4、對(duì)卡拉膠寡糖及其衍生物的部分凝血活酶時(shí)間(t APTT)和凝血酶原時(shí)間(t PT)進(jìn)行測(cè)定，以反映它們的抗凝血活性。結(jié)果表明，卡拉膠寡糖及其衍生物對(duì)內(nèi)源性凝血系統(tǒng)具有