DBC2及CHEK2基因突變與上海市早發(fā)非家族性乳腺癌發(fā)病關(guān)系的研究.pdf

1、[研究背景]:乳腺癌發(fā)生與各種因素有關(guān),研究發(fā)現(xiàn),在所有的乳腺癌中大約5～10％為遺傳性乳腺癌,而90～95％為散發(fā)性乳腺癌。在乳腺癌的多級演進(jìn)過程中每一步都涉及到一種或更多調(diào)節(jié)基因的突變。DBC2(deleted in breast cancer)屬于-種抑癌基因,定位于人類染色體8p21,全長20.5Kbp,又名Rhobtb2。DBC2是一種非典型的Rho GTP酶,其正常功能是預(yù)防與腫瘤發(fā)生相關(guān)的異常細(xì)胞增殖。在乳癌細(xì)胞株中導(dǎo)入D

2、BC2后可使其生長受抑,然而其在乳腺癌中發(fā)生自然突變者未能使腫瘤細(xì)胞生長受限。這些發(fā)現(xiàn)均表明DBC2在乳腺癌中起了腫瘤抑制基因的作用。DBC2調(diào)節(jié)很多重要的過程,包括肌動蛋白細(xì)胞骨架的形成,基因的轉(zhuǎn)錄,細(xì)胞周期進(jìn)展以及跨膜運(yùn)輸?shù)?并作為轉(zhuǎn)錄因子E2目的新型結(jié)合靶點(diǎn),在細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。對DBC2活性的生物學(xué)研究證明過表達(dá)DBC2可抑制乳腺癌細(xì)胞系的生長,然而其在原發(fā)性腫瘤中的點(diǎn)突變使得這種功能喪失。而60％的乳腺癌患者體

3、內(nèi)缺少DBC2基因,是非遺傳性乳腺癌相關(guān)的腫瘤抑制基因之一。由于90％以上的乳腺癌病例屬于非遺傳疾病,所以DBC2乳腺癌抑制基因的發(fā)現(xiàn)對乳腺癌的治療具有重大意義。 細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶2(CHEK2,Chk2)最初是作為一種在DNA受損時做出反應(yīng)的重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物,以及一種候選的腫瘤抑制基因。DNA損傷后,CHEK2激酶磷酸化激活其下游的多種DNA修復(fù)基因,它的缺陷導(dǎo)致不同類型的散發(fā)或遺傳性人類惡性腫瘤。2002年在大型乳腺癌家系

4、中科學(xué)家鑒別出CHEK2 1100delC變異體,并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在來自718個無BRCA1與BRCA2突變的西歐和北美家族的乳腺癌個體有5.1％的突變,而在健康人中有1.1％發(fā)現(xiàn)突變。經(jīng)評估,1100delC突變使得婦女乳腺癌風(fēng)險增加將近兩倍。2004年CHEK2乳腺癌病例對照協(xié)會研究了10860名乳腺癌病例和9065例對照組,這些人來自五個國家的10個病例對照研究。1.9％的病例和0.7％的對照組(OR 2.34;95％CI 1.72-

5、3.20)發(fā)現(xiàn)有突變。這項(xiàng)大的研究證明1100delC等位基因使得乳腺癌風(fēng)險提高了兩倍,對無家族史的婦女研究也得出同樣的結(jié)果。在早發(fā)患者中1100delC也可得到較高的乳腺癌優(yōu)勢比趨勢,并且乳腺癌家族中攜帶者要比未攜帶者發(fā)病年齡早。 目前,早發(fā)性乳腺癌(發(fā)病年齡低于40歲)越來越多見,特別是我國乳腺癌的發(fā)病年齡要比西方人群早10～15歲,因此探尋其中原因以及鑒定高危人群成為迫切問題。而我國相關(guān)研究還尚未展開。 本試驗(yàn)旨在

6、研究中國上海地區(qū)無BRCA1/2突變的早發(fā)非家族性乳腺癌患者DBC2和CHEK2基因的突變情況,探討疾病與突變相關(guān)性。 [目的]:本研究通過對無BRCA1/2突變的上海市早發(fā)性家族史陰性的乳腺癌患者DBC2及CHEK2基因的突變檢測,進(jìn)一步分析兩種基因突變與中國乳腺癌易感性的可能關(guān)系。 [方法]:對45例無BRCA1/2突變的早發(fā)非家族性乳腺癌患者與30例正常人進(jìn)行外周血基因組DNA提取。對DBC2基因的第5及第9外顯子

7、和CHEK2基因第10外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測序,分析上述基因突變情況與乳腺癌發(fā)病之間的關(guān)系。 [結(jié)果]: (1)在45例早發(fā)非家族性乳腺癌患者中,8例DBC2基因第5外顯子第7776位堿基上發(fā)現(xiàn)了一個新的錯義突變+7776C>T(P.Leu288Phe),突變率為17.78％,對照組中無此突變。經(jīng)Fisher確切概率法分析,第5外顯子7776位堿基突變率在早發(fā)非家族性乳腺癌患者中高于正常對照組(雙側(cè)

8、檢驗(yàn)P=0.0371)。 (2)DBC2第5外顯子突變者與未突變者相比,發(fā)病年齡(t>0.05),ER(雙側(cè)P=0.2693)、Her-2(雙側(cè)P=1.0888)無差異性. (3)在所有病例及對照組中DBC2基因第9外顯子未發(fā)現(xiàn)SNP位點(diǎn),二組突變率無差異性。 (4)在所有病例及對照組中未發(fā)現(xiàn)CHEK2第10外顯子CHEK2c.1100delC突變,但在所有的病例組與對照組CHEK2第10外顯子中均發(fā)現(xiàn)4處SNP

9、位點(diǎn),其突變類型,堿基改變,突變位點(diǎn)均相同,二組突變率無差異性。 [結(jié)論]: (1)乳腺癌患者DBC2基因第5外顯子+7776C>T突變率高于正常對照組,可能是中國單純早發(fā)性乳腺癌特有的突變位點(diǎn),在中國人早發(fā)性乳腺癌遺傳易感性中的作用有很大意義；有可能作為中國早發(fā)性乳腺癌高?；蛲蛔兾稽c(diǎn),從而建立一個乳腺癌易感人群篩選的平臺,這將對社會和經(jīng)濟(jì)各個方面帶來巨大的受益,需要進(jìn)行進(jìn)一步研究確認(rèn)。對其功能學(xué)研究以及一級親屬該基因

10、的篩查工作將進(jìn)一步展開。 (2)我們比較了突變患者與未突變患者的發(fā)病年齡,ER、PR、Her-2的攜帶情況,并未發(fā)現(xiàn)差異,可能由于樣本量偏小造成,大樣本資料的收集有助于突變患者相關(guān)疾病信息分布趨勢的獲得。 (3)DBC2第9外顯子突變在上海早發(fā)非家族性乳腺癌患者中較少見,可能由于樣本數(shù)量偏小及選擇偏差,未來大樣本研究有待進(jìn)行以闡明該基因突變在中國人群中的分布與作用。 (4)CHEK2 1100delC基因突變在中