脂聯(lián)素與兒童非酒精性脂肪肝病的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)最早于1980年在沒(méi)有飲酒史的2型糖尿病婦女中發(fā)現(xiàn)，成人研究認(rèn)為非酒精性脂肪性肝病是指肝細(xì)胞由脂肪變性發(fā)展到炎癥、纖維化、肝硬化及終末期肝病的一組疾病譜。NAFLD的診斷標(biāo)準(zhǔn)包括臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)、臨床分型標(biāo)準(zhǔn)和組織學(xué)診斷，而肝活檢病理檢查是診斷NAFLD的金標(biāo)準(zhǔn)。目前對(duì)于NAFLD發(fā)病機(jī)制的研究比較公認(rèn)的是“二次打擊理論”，即1)肝細(xì)胞內(nèi)脂

2、質(zhì)堆積；2)胰島素抵抗及脂肪酸氧化應(yīng)激誘發(fā)的炎癥和細(xì)胞凋亡。兩次打擊過(guò)程中都有大量的細(xì)胞因子參與，而第二次打擊則被認(rèn)為是由單純的脂肪肝轉(zhuǎn)變?yōu)榉蔷凭灾靖窝?NASH)的關(guān)鍵所在。隨著肥胖兒童在全世界范圍的增加，近年來(lái)，國(guó)外有關(guān)肥胖兒童脂肪肝的狀況日益受到關(guān)注。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)兒童在4歲時(shí)就可能表現(xiàn)為NAFLD，也有報(bào)道在肝活檢中發(fā)現(xiàn)纖維化，肝硬化。但是肥胖兒童中NAFLD的發(fā)生情況并不清楚，而且對(duì)肥胖兒童NAFLD的病理變化沒(méi)有系統(tǒng)研究。

3、 脂聯(lián)素是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，由脂肪細(xì)胞特異性合成并分泌，人脂聯(lián)素蛋白由244個(gè)氨基酸組成。目前研究認(rèn)為脂聯(lián)素具有調(diào)節(jié)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、增加胰島素敏感性、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種生物學(xué)效應(yīng)。因此，認(rèn)為脂聯(lián)素可能對(duì)肝臟的“二次打擊”均有保護(hù)作用。 肥胖并發(fā)非酒精性脂肪肝病的兒童血清脂聯(lián)素濃度有無(wú)變化?如果有變化，與非酒精性脂肪肝病的發(fā)生有無(wú)關(guān)系?這些問(wèn)題有待于進(jìn)一步研究。 目的本課題以學(xué)齡期兒童為研究對(duì)象，按照是否有超

4、聲下脂肪肝和血清轉(zhuǎn)氨酶是否升高將肥胖兒童分成三組，研究血清脂聯(lián)素與臨床診斷的非酒精性脂肪肝病的相關(guān)性，了解肥胖兒童中NAFLD的發(fā)生情況；以高脂飲食的幼兔模型模擬青春期前肥胖兒童NAFLD的形成，研究血清脂聯(lián)素與病理診斷的非酒精性脂肪肝病的相關(guān)性。 對(duì)象1、2003年7月-2005年8月期間收住我院內(nèi)分泌病區(qū)的6-16歲肥胖兒童113例，診斷標(biāo)準(zhǔn)：體重在1995年九城市同年齡同性別第97百分位以上，無(wú)已知的內(nèi)分泌、遺傳代謝性和腎

5、臟疾病。其中男78例，女35例；對(duì)照組為同期健康體檢兒童37例，體重在1995年九城市同年齡同性別第25-75百分位之間。所有的研究對(duì)象都無(wú)飲酒史，無(wú)長(zhǎng)期藥物服用史，無(wú)既往肝病史，肝炎病毒和TORCH檢查結(jié)果均為陰性。 2、32只一月齡健康雄性新西蘭大耳兔為研究對(duì)象，隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組10只，以普通飼料喂養(yǎng)；模型組共22只，以高脂飼料喂養(yǎng)，按喂養(yǎng)時(shí)間的不同將模型組分成兩個(gè)亞組，分別為8周組和12周組。高脂飼料的配方參照SD大鼠

6、非酒精性脂肪肝炎模型的建立方法，以普通飼料+100g/kg豬油+20g/kg膽固醇組成。 方法 1、測(cè)量錄入兒童的性別、年齡、身高、體重、Tanner分期。生化指標(biāo)：測(cè)量血清甘油三酯(TG)、總膽周醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。ELISA法測(cè)定空腹血清脂聯(lián)素。計(jì)算體質(zhì)指數(shù)(BMI)=體重/身高的平方(kg/m2)。肝臟超聲檢查，并按照超聲和ALT結(jié)果

7、將肥胖兒童分成三組：1組為肝臟B超和ALT均在正常范圍；2組為肝臟B超脂肪肝、但ALT尚在正常范圍；3組為肝臟B超和ALT均異常。 2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：在實(shí)驗(yàn)的第8周和第12周分批處死動(dòng)物。處死前禁食10小時(shí)以上，稱(chēng)重，麻醉后取靜脈血，檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、TG、TC和脂聯(lián)素。動(dòng)物處死取肝臟稱(chēng)濕重后，計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重/動(dòng)物空腹體重)。取部分肝組織固定于10％的中性甲醛溶液中以備HE染色，進(jìn)行組織學(xué)觀察。組織學(xué)診斷非酒精性

8、脂肪肝病病理分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)參照2002年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組制定的草案。 3、統(tǒng)計(jì)：所有的統(tǒng)計(jì)采用SPSS11.5軟件分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。連續(xù)性正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布的變量經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后使之正態(tài)化后再分析，或者采用中位數(shù)進(jìn)行分析；計(jì)數(shù)資料以列聯(lián)表Fisher精確檢驗(yàn)法；組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(兩兩比較采用LSD方法或非配對(duì)的t檢驗(yàn))，脂聯(lián)素相關(guān)因素分析采用stepw

9、ise多元回歸方法。 結(jié)果一： 臨床研究部分1、對(duì)照組和肥胖組的各項(xiàng)指標(biāo)比較肥胖組血清TC、TG、ALT、LDL-C較對(duì)照組高(均P＜0.005)，而HDL-C和脂聯(lián)素則較對(duì)照組低(P分別＜0.005和＜0.001)。 2、肥胖兒童中NAFLD的發(fā)病情況及各組間的各項(xiàng)指標(biāo)比較113例肥胖兒中，63例并發(fā)NAFLD(55.75％)，其中2組22例，3組41例。年齡、性別和性發(fā)育程度在三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)

10、。1組的BMI顯著低于2、3組(p＜0.05)，1組的血清脂聯(lián)素水平顯著高于2、3組(p＜0.005)，但兩者在2組與3組之間差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。各項(xiàng)血脂水平，如HDL-C、LDL-C、TC、TG三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。 3、脂聯(lián)素和其他變量之間的相關(guān)性分析以年齡、性別、BMI、發(fā)育程度、TG、HDL-C、LDL-C和NAFLD為因素進(jìn)行多元回歸分析。發(fā)現(xiàn)性別、BMI、NAFLD、和HDL-C是

11、影響兒童血清脂聯(lián)素水平的獨(dú)立決定因素。血清脂聯(lián)素水平與BMI、性別、NAFLD呈負(fù)相關(guān)(P值分別為0.001，0.009和0.017)，與HDL-C呈正相關(guān)(P=0.033)。 二：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分1、與對(duì)照組相比，8周組的血清脂聯(lián)素較低(P=0.034)，但是12周組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.058)。2、對(duì)照組的肝指數(shù)、Lg(ALT)、Lg(AST)、Lg(TG)、Lg(TC)、肝細(xì)胞脂肪浸潤(rùn)、肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分都低于8周組和

12、12周組(P＜0.05)，但是8周組和12周組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。ALT/AST在三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3、多元回歸分析發(fā)現(xiàn)血清脂聯(lián)素水平與Lg(TC)、肝細(xì)胞脂肪浸潤(rùn)成負(fù)相關(guān)，P分別為0.003和0.03。與肝指數(shù)、Lg(ALT)、Lg(AST)、Lg(TG)、肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分均無(wú)明顯相關(guān)。 結(jié)論 1、血清脂聯(lián)素水平與BMI、肝臟脂肪浸潤(rùn)程度呈負(fù)相關(guān)，與HDL-C呈正相關(guān)。2