半胱天冬氨酸蛋白酶抑制劑對(duì)胰島細(xì)胞的保護(hù).pdf

1、目的：
　　 探索半胱天冬氨酸蛋白酶抑制劑在胰島分離、純化及培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)胰島細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,每組各用新生豬5只,實(shí)驗(yàn)組在胰島分離純化過(guò)程中加入caspase抑制劑(Z-VAD-FMK,濃度為20um/d1)進(jìn)行處理后收集胰島,于第2、4、6天換液培養(yǎng),每次換液培養(yǎng)基內(nèi)加入(Z-VAD-FMK,濃度為20um/d1),對(duì)照組不加caspase抑制劑Z-VAD-FMK處理

2、,同樣條件下分離純化及培養(yǎng),兩組細(xì)胞培養(yǎng)至第7天分別進(jìn)行以下檢測(cè):應(yīng)用caspase-3活性檢測(cè)試劑盒對(duì)胰島凋亡的效應(yīng)酶caspase-3活性進(jìn)行檢測(cè)；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)bcl-2及p53基因表達(dá)情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)胰島凋亡率；通過(guò)葡萄糖靜態(tài)反應(yīng)培養(yǎng)方法進(jìn)行胰島素釋放試驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 通過(guò)對(duì)Caspase3活性的檢測(cè),結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組Caspase3活性穩(wěn)定在低水平,而對(duì)照組Caspase3的活性明顯升高(P

3、<0.001)；RT-PCR檢測(cè)bcl-2和P53基因,結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組bcl-2表達(dá)增強(qiáng),而p53表達(dá)減弱；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)胰島細(xì)胞凋亡率,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯降低(P<0.001)；通過(guò)葡萄糖刺激胰島素釋放實(shí)驗(yàn),對(duì)胰島分泌功能的檢測(cè),得出結(jié)果,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組胰島分泌功能無(wú)明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 半光天冬氨酸蛋白酶抑制劑(Z-VAD-FMK:濃度為20um/d1)對(duì)體外培養(yǎng)的胰島細(xì)胞具有顯著抗凋