半夏瀉心湯含藥血清抑制胃癌細(xì)胞上清對人腹膜間皮細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、目的：通過研究半夏瀉心湯含藥血清抑制胃癌細(xì)胞（BGC-823）上清對人腹膜間皮細(xì)胞（HMrSV5）損傷的影響，探討半夏瀉心湯含藥血清干預(yù)胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：收集胃癌細(xì)胞（BGC-823）分泌的上清液與人腹膜間皮細(xì)胞（HMrSV5）共培養(yǎng)在正常兔血清基后分別用100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL濃度的半夏瀉心湯含藥兔血清進(jìn)行干預(yù)。實驗分組為對照組（正常腹膜間皮細(xì)胞），模型組（接觸胃癌細(xì)胞上清的

2、腹膜間皮細(xì)胞），100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL半夏瀉心湯含藥血清組。（1）光鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化；（2）MTT法檢測各組細(xì)胞的生長活性；（3）流式細(xì)胞儀及熒光染色檢測各組細(xì)胞增殖凋亡變化；（4）檢測各組細(xì)胞上清氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA、GSH的水平；（5）Western Blot法檢測各組細(xì)胞中Bcl-2、Bax、TGF-β1蛋白含量的變化；（6）ELISA法檢測各組細(xì)胞上清中的TGF-β1蛋白的

3、表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）接觸胃癌細(xì)胞上清的間皮細(xì)胞隨著半夏瀉心湯含藥血清濃度的2倍遞增，形態(tài)由松散細(xì)長的纖維狀逐漸的變圓呈緊密排列，細(xì)胞間骨架由細(xì)小的微絲逐漸變多裸區(qū)逐漸消失；
　?。?）熒光染色顯示接觸胃癌細(xì)胞上清后的間皮細(xì)胞顏色多為橙紅色并有核破裂現(xiàn)象，隨著藥物血清的干預(yù)細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度的遞增逐漸下降；
　?。?）經(jīng)胃癌上清干預(yù)后的間皮細(xì)胞MTT還原能力低于其他組別，隨著藥物濃度的遞增，受胃癌上清干預(yù)后的腹膜

4、間皮細(xì)胞還原能力逐漸遞增；
　?。?）氧化應(yīng)激指標(biāo)顯示對照組中MDA水平最低，SOD、GSH水平最高，100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL半夏瀉心湯含藥血清組中MDA的水平由高到低依次排列但均低于模型組，SOD、GSH水平均高于模型組；
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示接觸胃癌上清的間皮細(xì)胞與對照組相比，G0/G1/G2/M比例由53.5％增長至79.3%，S期比例由46.5%降低至20.7%，不同濃度的含藥

5、血清組與模型組相比G0/G1/G2/M比例，隨著濃度的遞增有逐漸降低的趨勢，S期比例逐漸升高；
　?。?）免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，胃癌上清能夠誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞低表達(dá)Bcl-2高表達(dá)Bax、TGF-β1蛋白，經(jīng)半夏瀉心湯藥物血清干預(yù)后Bcl-2蛋白表達(dá)有所上升，Bax及TGF-β1蛋白表達(dá)隨著藥物濃度的遞增逐漸降低并呈濃度依賴性；
　?。?）ELISA法檢測結(jié)果顯示接觸胃癌上清的間皮細(xì)胞TGF-β1含量與對照組相比明顯升高；1