原代間皮細(xì)胞移植防治損傷性腹膜粘連的研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目： 原代叫皮細(xì)胞移梢防治損傷4 阡腹膜煮l -T 。T L E 連的母『究口，e m 小柚d 一擊d 們m 吣m 血g m l 即?岫u a I 訕m 刪Ⅱ％m l d ?“z u ●e 1 1 m 1 1 湘I p 砷m c m a d ?一級學(xué)科二級學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)兒科學(xué)論文作者：吳博指導(dǎo)教師： 谷繼9 目教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院2 0 0

2、7 年5 月。霸；甓，一一，，■一{j』Jjjr ’i i i＼，～端出勘Ⅻ業(yè)掣掣掣些?言手，～，●：；：_-：l_}i扣^茸q，?lJ～j，童掣掣掣毒j罰磊弱一柏一i《爭 熱攀，，lll—iLhPj二FnEPHPiE¨巨．”“ l ㈨o F 琴Ⅳ～i i 川天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文論文二 網(wǎng)膜間皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定摘要：目的通過實(shí)驗(yàn)一我們得出腹膜間皮細(xì)胞細(xì)胞損傷是造成腹膜粘連的主要原因之一。修復(fù)腹膜間皮細(xì)胞，是減輕

3、腹膜粘連的手段之一。為研究腹膜間皮細(xì)胞的培養(yǎng)及方法形態(tài)學(xué)功能，我們進(jìn)行了腹膜間皮細(xì)胞的培養(yǎng)。我們?yōu)榇瞬捎昧舜缶W(wǎng)膜消化法，以從大鼠體內(nèi)分離網(wǎng)膜間皮細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)及鑒定。方法為尋找消化網(wǎng)膜間皮細(xì)胞的最佳胰蛋白酶濃度及時(shí)間，分別用0 ．0 6 2 5 ％、0 ．1 2 5 ％、0 ．2 5 ％胰蛋白酶一O ．0 2 ％E D T A N a ：進(jìn)行5 、1 0 、1 5 分鐘的大鼠網(wǎng)膜消化。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算，得出濃度與時(shí)間之間的關(guān)系。同時(shí)將

4、離體大網(wǎng)膜按面積不同分為四組，分別為l c m 2 、4 c m 2 、6 c m 2 、9 c m 2 ，計(jì)算出在最佳消化時(shí)間與最佳消化濃度情況下，消化面積與所得細(xì)胞之間的相關(guān)性。收集細(xì)胞懸液經(jīng)離心后進(jìn)行間皮細(xì)胞培養(yǎng)；觀察細(xì)胞形態(tài)，計(jì)算細(xì)胞純度；通過免疫組化鑒定細(xì)胞。結(jié)果從大網(wǎng)膜消化下的原代間皮細(xì)胞光鏡下呈成串葡萄樣，在培養(yǎng)瓶內(nèi)初呈拉網(wǎng)狀生長，融合后的細(xì)胞呈多邊形，邊緣不齊，形成鋪路鵝卵石樣外觀。細(xì)胞表面標(biāo)志鑒定顯示角蛋白抗原陽性，證

5、實(shí)分離培養(yǎng)的確是網(wǎng)膜間皮細(xì)胞。通過胰酶濃度與消化時(shí)間的正交分析得出以0 ．2 5 ％胰蛋白酶消化大網(wǎng)膜1 0 分鐘所得到的間皮細(xì)胞數(shù)量最多，且形態(tài)功能正常。通過相關(guān)性分析得出間皮細(xì)胞數(shù)量與大網(wǎng)膜消化面積呈正相關(guān)，( r = O ．9 8 1 ，P = O ．0 1 8 9 < 0 ．0 5 ) ，相關(guān)方程為：Y ( 細(xì)胞數(shù))= - 0 ．2 6 0 + 0 ．4 9 7 ×X ( 面積) 。結(jié)論間皮細(xì)胞可以通過胰蛋白酶網(wǎng)

6、膜消化法進(jìn)行培養(yǎng)，0 ．2 5 ％的胰蛋白酶一O ．0 2 ％E D T A N a 。消化1 0 分鐘所得的間皮細(xì)胞數(shù)最多，且細(xì)胞形態(tài)及功能正常。經(jīng)此種方法培養(yǎng)所得的間皮細(xì)胞數(shù)量與消化所用大網(wǎng)膜面積成正相關(guān)。[ 關(guān)鍵詞] 大鼠 網(wǎng)膜間皮細(xì)胞分離培養(yǎng)胰蛋白酶濃度論文三原代間皮細(xì)胞移植防治損傷性腹膜粘連的研究摘要：目的 腹膜粘連是術(shù)后常見的并發(fā)癥之一，其發(fā)生率可達(dá)9 0 ％以上，腹膜損傷、間皮細(xì)胞損傷、纖維蛋白滲出、成纖維細(xì)胞過度增殖是粘

7、連形成的病生理基礎(chǔ)，而粘連形成的各個(gè)環(huán)節(jié)又相互關(guān)聯(lián)。在明確了腹膜粘連形成的細(xì)胞學(xué)機(jī)制后，有效促進(jìn)間皮細(xì)胞修復(fù)、抑制成纖維細(xì)胞過度增殖是防治腹膜粘連的有效方法。為此我們對通過移植間皮細(xì)胞防治損傷性腹膜粘連進(jìn)行了初步探討。方法取健康W i s t a r 大鼠4 0 0 只，隨機(jī)分為5 組，每組8 0 只，雌雄各半。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)A 組：粘連模型組：單純鉗夾腸壁，制造無菌性損傷模型；B 組：間皮細(xì)胞移植組：在A 組基礎(chǔ)上腹腔移植間皮細(xì)胞。C