miR-224靶向RASSF8在宮頸癌進(jìn)展中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　驗(yàn)證miR-224在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)，并明確miR-224對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的作用及調(diào)控機(jī)制。
　　方法:
　　采用Stem-loop RT-PCR法檢測148例宮頸鱗癌組織和64例宮頸正常上皮組織的miR-224的表達(dá)水平，收集整理臨床病理資料，分析miR-224的表達(dá)水平與宮頸癌臨床不良預(yù)后因素的相關(guān)性。
　　在宮頸癌細(xì)胞株Siha和CaSki中，利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)miR-224以及s

2、iRNA干擾RASSF8的表達(dá)，利用MTT法檢測細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期分布，劃痕試驗(yàn)和Transwell侵襲試驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力，并利用Real timeRT-PCR和Western Blot的方法檢測宮頸癌組織中RASSF8的mRNA和蛋白水平，最后利用雙熒光素酶報(bào)告基因的方法確認(rèn)miR-224與RASSF8靶向關(guān)系
　　結(jié)果:
　　1.miR-224在宮頸鱗癌組織的表達(dá)水平與宮頸正常上皮組織相比顯

3、著下調(diào)。miR-224高表達(dá)組有更高的FIGO分期、更大的腫瘤體積，更易于發(fā)生盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深間質(zhì)浸潤、以及脈管浸潤。
　　2.在宮頸癌細(xì)胞株中，過表達(dá)miR-224可增加Siha和CaSki細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)細(xì)胞劃痕的愈合和細(xì)胞的侵襲并且下調(diào)RASSF8的蛋白水平，但是對(duì)周期以及凋亡無明顯影響。
　　3.宮頸癌組織中RASSF8的表達(dá)量明顯低于正常宮頸組織。
　　4.miR-224可下調(diào)含RASSF83'UTR區(qū)

4、報(bào)告質(zhì)粒熒光素酶的活性，而不影響3'UTR區(qū)突變報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性。
　　5.在宮頸癌細(xì)胞中，干擾RASSF8的表達(dá)可促進(jìn)Siha和CaSki細(xì)胞的遷移和侵襲能力但是對(duì)增值無影響。
　　結(jié)論:
　　1.miR-224的表達(dá)水平在宮頸癌組織與正常組織相比顯著上調(diào)并且miR-224高表達(dá)與宮頸癌預(yù)后不良因素相關(guān).
　　2.miR-224表達(dá)上調(diào)參與了宮頸癌的進(jìn)展過程，miR-224通過靶向RASSF8調(diào)控宮頸癌細(xì)