Profilin-1在AGEs誘導的大鼠心肌病變中的作用研究.pdf

1、背景：
　　糖尿病心肌病變(Diabetic cardiomyopathy，DCM)是糖尿病致死的主要并發(fā)癥。目前認為DM的發(fā)生與發(fā)展主要與AGEs生成增多密切相關，AGEs可通過直接或間接通路引起氧化應激，內皮功能障礙，組織損傷與重構等。研究發(fā)現(xiàn)AGEs/RAGE信號通路是最為重要的一條信號通路，推測其可能是防治DCM的重要治療靶點。在心血管組織中表達的profifin-1是關鍵的肌動蛋白調節(jié)蛋白，可直接影響細胞骨架(cytos

2、keleton)的結構，而研究發(fā)現(xiàn)細胞骨架結構的改變可能是心肌肥厚和心肌損傷的一個關鍵促進因素;Rho/ROCK/profilin-1介導肌動蛋白纖維的聚合，導致細胞骨架結構重構，推測該通路可能在DCM中起作用。目前未見profilin-1與DCM的相關研究。本研究擬建立AGEs誘導的大鼠心肌損傷模型，觀察心肌組織形態(tài)和功能變化、心肌纖維化、心肌損傷及各種細胞因子的變化以及profilin-1的表達;應用shRNA腺病毒沉默PROFIL

3、IN-1基因表達技術，觀察干預后對AGEs誘導心肌病變的影響，直接論證profilin-1在AGEs誘導的心肌損傷中的關鍵作用;探尋糖尿病心肌病變的防治靶點，為開發(fā)和研制新藥提供理論依據。
　　方法：
　　配制AGEs;構建沉默PROFILIN-1基因shRNA腺病毒載體。將SD大鼠隨機分組:正常對照組（control組）:連續(xù)尾靜脈注射生理鹽水;AGEs組:連續(xù)尾靜脈注射AGEs(25mg/kg);AGEs+shProfi

4、lin-1組:間斷心尖注射PFN1 shRNA及連續(xù)尾靜脈注射AGEs(25mg/kg);空病毒組（empty virus control組）:間斷心尖注射無處理的載體腺病毒。8周后行心電圖檢查，觀察心電圖變化，快速測糖法測量空腹血糖;處死大鼠取血清測ICAM-1、ADMA、MDA水平;取心肌組織行HE染色觀察心肌病變;心肌免疫組化觀察profilin-1蛋白表達情況;提取心肌蛋白并通過Western Blot檢測profilin-1、

5、Rho、NF-κB蛋白表達情況;提取心肌組織RNA并通過RT-PCR檢測profilin-1mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表達情況。
　　結果：
　　(1) PFN1 shRNA干擾腺病毒的細胞感染效率驗證結果示腺病毒載體構建成功。(2)心電圖示AGEs組T波下降幅度與control組明顯增大，且有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。(3)心肌組織HE染色顯示(400×):相較于control組，AGEs組心肌細

6、胞排列紊亂，胞質渾濁;胞核增大，核深染，部分心肌細胞出現(xiàn)核邊集;心肌間質纖維增多，排列紊亂，細胞間隙充盈，可見炎性細胞浸潤。shProfilin-1組同AGEs組比較細胞排列較規(guī)律，無明顯水腫，胞核清晰，心肌間質無明顯增生及炎性細胞浸潤。(4)心肌免疫組化(400×)示AGEs組與對照組相比，profilin-1高表達，P＜0.01;shProfilin-1組與AGEs組相比，profilin-1明顯下調，P＜0.01(5)AGEs組與

7、正常對照組相比，Profilin-1、Rho、NF-κB表達顯著增加;shProfilin-1組與AGEs組相比，Profilin-1、Rho、NF-κB表達量顯著減少，各項差異均有統(tǒng)計學意義，P＜0.05(6)AGEs組與正常對照組相比，Profilin-1 mRNA、MMP-2 mRNA在心肌中的表達顯著增加，分別為P＜0.01，P＜0.05;shProfilin-1組與AGEs組相比Profilin-1 mRNA、MMP-2 mR

8、NA在心肌中的表達顯著減少;分別為P＜0.01，P＜0.05;MMP-9 mRNA的表達各組間無統(tǒng)計學差異，P＞0.05(7)AGEs組與正常對照組相比，血清ICAM-1、ADMA、MDA的表達顯著增加，P＜0.05;shProfilin-1組與AGEs組相比血清ICAM-1、ADMA、MDA的表達顯著減少，P＜0.05。
　　結論：
　　(1) Profilin-1介導了AGEs誘導的大鼠心肌損傷及重構;其機制涉及心肌細胞