DADS誘導人胃癌MGC803細胞周期阻滯相關基因的表達研究.pdf

1、目的：二烯丙基二硫(DADS) 可以誘導多種腫瘤細胞周期阻滯而起到抑制增殖的作用，但具體作用機制尚不清楚。本實驗旨在研究DADS誘導人胃癌細胞MGC803細胞周期阻滯的相關基因表達，探討其分子機制。 方法：MTT比色實驗分析DADS 對MGC803細胞增殖抑制作用，HE染色觀察IC50值濃度的DADS對體外培養(yǎng)的人胃癌 MGC803細胞形態(tài)的影響，流式細胞術分析不同濃度和作用時間DADS對MGC803細胞的周期分布；通過Supe

2、rArray人細胞周期基因芯片檢測DADS作用于MGC803細胞后周期相關基因的表達譜；RT-PCR和western-blot驗證與篩選關鍵性基因。 結(jié)果：MTT 比色法檢測顯示：DADS能顯著抑制人胃癌MGC803細胞增殖，呈濃度和時間依賴性。20、30、40、50mg·L-1DADS處理24h后，對癌細胞增殖的抑制率分別為18.38％、30.67％、38.87％ 、43.05％ ，處理48h抑制率分別為29.58％、40.1

3、3％、45.29％、 53.57％，處理72h抑制率分別為34.84％、48.66％、62.38％、68.07％，與對照組比較，差異有顯著性意義。 HE染色結(jié)果顯示：30mg·L-1DADS處理12h后，與對照組相比較，部分MGC803細胞變圓，浮起于培養(yǎng)基中，胞漿豐富，細胞核變小，染色變淡，細胞體積增大，核仁數(shù)目明顯減少，散在分布生長。 流式細胞術分析結(jié)果提示：DADS呈濃度依賴性的阻滯MGC803細胞在G2/M期，與

4、對照組比較，差異有顯著性意義。30mg·L-1DADS作用MGC803細胞12小時，G2/M期百分率達26.4％，比對照組(6.9％)升高了3倍多。 基因芯片結(jié)果顯示：30mg·L-1DADS作用MGC803細胞4h后與對照組比表達上調(diào)2倍以上的基因有：CDC45L、CDK5R1(p35) 、CDKN1A(p21) 、CUL4A、GADD45α、RAD17、TP53；表達下調(diào)2倍以上的基因有：ANAPC5、 ATR、BRCA1、

5、CCNA2、CCNB2、CCNE1、CCNE2、CDC16、CDC6、CDK5RAP1、GTF2H1、MCM5、RAD9A、RGC32。該21個差異基因與DADS誘導人胃癌MGC803細胞G2/M周期阻滯密切相關，其中與G2/M周期相關的基因包括：CDK5R1、TP53、p21、GADD45α、ANAPC5、ATR、BRCA1、CCNCA2、CCNB2、CDC6、CDC16、GTF2H1、RGC32等。 RT-PCR結(jié)果顯示：3

6、0mg·L-1DADS 處理MGC803細胞4h、8h、12h后，與對照組比較，TP53、GADD45α、p21mRNA表達增強，CyclinB1mRNA表達降低。 Western blot結(jié)果表明：30mg·L-1DADS作用MGC803細胞6h、12h、24h后，p53、GADD45α、p21蛋白表達上調(diào)，CyclinB1蛋白表達下調(diào)。 結(jié)論： 1.DADS可抑制人胃癌MGC803細胞生長，并與細胞G2/M期

7、阻滯有關。 2.DADS誘導人胃癌MGC803細胞G2/M周期阻滯，可能是多個基因和多條信號轉(zhuǎn)導通路共同作用的結(jié)果。這些基因中也有G1期基因（CyclinE1和CyclinE2）的改變，說明DADS對整個細胞周期都有一定的影響。 3.DADS對MGC803細胞G2/M周期阻滯的分子機制可能與TP53、GADD45α、p21基因表達增強，CyclinB1基因表達降低有關；同時引起p53、GADD45α、p21蛋白表達上調(diào)，