RNA干擾對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞CDX2基因表達(dá)及其生物學(xué)行為的研究.pdf

1、目的：探討小分子干擾RNA(siRNA)對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞CDX2基因表達(dá)及其生物學(xué)行為的影響。 方法：用LipofectamineTM2000把negative control-siRNA(陰性對(duì)照組)和CDX2-siRNA(實(shí)驗(yàn)組)轉(zhuǎn)染MGC803細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后，采用實(shí)時(shí)定量PCR及蛋白印跡技術(shù)分別檢測(cè)CDX2 mRNA及蛋白的表達(dá)。四唑鹽(MTT)法和克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MGC803細(xì)胞增殖的變化；應(yīng)用體外侵襲實(shí)驗(yàn)及遷移實(shí)

2、驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)CDX2-siRNA對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞侵襲力和遷移能力的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)MGC803細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化。 結(jié)果：陰性對(duì)照siRNA和CDX2-siRNA和由脂質(zhì)體介導(dǎo)成功轉(zhuǎn)染胃癌MGC803細(xì)胞，CDX2-siRNA有效抑制了胃癌細(xì)胞CDX2 mRNA的表達(dá)，與陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞比較分別降低了87.59％和88.91％(P<0.05)；CDX2-siRNA抑制胃癌MGC803細(xì)胞CDX2蛋白

3、的表達(dá)，與陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞比較降低了70.85％和79.3％。CDX2-siRNA抑制MGC803細(xì)胞的增殖，與陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組比較增殖分別抑制了75.2％和85.8％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； CDX2siRNA促使更多MGC803細(xì)胞DNA含量聚集于G0/G1期附近，G0/G1期DNA含量比例為(72.38±1.76)％，與陰性對(duì)照組(56.67±0.83)％和未轉(zhuǎn)染組(59.18±1.24)％比較，差異有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(12.53±0.63)％，與與陰性對(duì)照組(4.46±0.73)％和未轉(zhuǎn)染組(5.42±0.32)％比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時(shí)，細(xì)胞體外侵襲力及遷移能力相應(yīng)減弱(P<0.05)。 結(jié)論：CDX2-siRNA能有效抑制人胃癌MGC803細(xì)胞CDX2mRNA及蛋白的表達(dá)，使細(xì)胞凋亡增加，使S期細(xì)胞的DNA含量下調(diào)，同時(shí)顯示細(xì)胞分裂停滯在G0/G1期附近，進(jìn)而抑制其增殖，并在一