沉默PRSS1對胃癌MGC803細胞遷移侵襲的影響.pdf

1、[目的]通過沉默 PRSS1基因的表達，觀察對胃癌MGC803細胞遷移侵襲的影響，探討PRSS1影響胃癌細胞增殖、遷移侵襲的分子機制。
　　[方法]1.采用免疫組織化學染色結(jié)合組織芯片（含正常胃粘膜、癌旁、高分化、中分化、低分化胃腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織）檢測胃癌組織中PRSS1蛋白的表達,并分析其表達的意義。2.利用siRNA干擾技術，構(gòu)建pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRi-PRSS1干擾質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染MGC803細胞，

2、經(jīng)殺稻瘟菌素Blasticidin S HCl篩選，建立PRSS1穩(wěn)定低表達的MGC803/miRi-PRSS1細胞系。利用RT-PCR和Western blot檢測MGC803/miRi-PRSS1細胞中PRSS1 mRNA和蛋白的表達。3.運用MTT法、平皿克隆形成實驗、劃痕愈合實驗、Transwell遷移侵襲實驗和流式細胞術檢測PRSS1低表達對MGC803細胞增殖、細胞周期和遷移侵襲的影響。
　　[結(jié)果]1.免疫組織化學染

3、色結(jié)果顯示：高分化、中分化、低分化胃腺癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中，PRSS1蛋白表達較正常胃粘膜組織、癌旁組織表達增加，且癌旁組織中的表達強于正常胃粘膜組織。2.構(gòu)建pcDNA6.2?-GW/EmGFP-miRi-PRSS1干擾質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染 MGC803細胞,篩選后建立 PRSS1穩(wěn)定低表達的MGC803/miRi-PRSS1細胞系。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示,干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞中PRSS

4、1 mRNA和蛋白表達量較空白組和載體對照組中mRNA和蛋白表達量均降低（P＜0.05）。3.PRSS1低表達對MGC803細胞增殖的影響：1）MTT結(jié)果顯示，空白組MGC803細胞的增殖率為0.814±0.003，干擾組 MGC803/miRi-PRSS1細胞的增殖率為0.501±0.002，載體對照組 MGC803/miRi細胞的增殖率為0.791±0.002?？瞻捉M MGC803細胞增殖率明顯高于干擾組MGC803/miRi-PR

5、SS1細胞（P＜0.05）,表明 PRSS1低表達后MGC803細胞的增殖活性降低（P＜0.05）。2）平皿克隆形成實驗顯示,干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞的克隆數(shù)為23±2個,空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/miRi細胞的克隆數(shù)分別為98±5個和89±3個,分別較干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞多75±3個和66±4個（P＜0.05）,表明 PRSS1低表達后MGC803細胞集落形成能力減弱（

6、P＜0.05）。4.PRSS1低表達對 MGC803細胞遷移侵襲的影響：1）劃痕愈合實驗顯示，劃痕24h小時末空白組MGC803細胞的遷移距離為188±8um，干擾組 MGC803/miRi-PRSS1細胞和載體對照組 MGC803/miRi細胞的遷移距離分別為105±3um和179±6um?？瞻捉MMGC803細胞和載體對照組 MGC803/miRi細胞遷移距離分別較干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞多83±5um和74±3u

7、m（P＜0.05）,表明PRSS1低表達后MGC803細胞遷移能力減弱（P＜0.05）。2）Transwell遷移實驗顯示，空白組 MGC803細胞遷移數(shù)為267±36個,干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞遷移數(shù)為60±8個,載體對照組MGC803/miRi細胞遷移數(shù)為245±32個。與空白組 MGC803和載體對照組MGC803/miRi細胞比較,干擾組 MGC803/miRi-PRSS1細胞遷移數(shù)分別少207±28個和18

8、5±24個（P＜0.05）,表明PRSS1低表達后MGC803細胞遷移能力降低（P＜0.05）。3）Transwell侵襲實驗顯示，空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/miRi細胞的穿膜細胞數(shù)分別為48±8個和40±7個,干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞穿膜細胞數(shù)為15±4個?？瞻捉MMGC803細胞和載體對照組MGC803/miRi細胞分別與干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞比較，其穿膜細胞數(shù)分別多33

9、±4個和25±3個（P＜0.05），表明PRSS1低表達后MGC803細胞侵襲能力降低（P＜0.05）。5.PRSS1低表達對MGC803細胞周期的影響：流式細胞術顯示，與空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/miRi細胞比較，干擾組MGC803/miRi-PRSS1細胞G0/G1期比率增加，而S期比率則降低（P＜0.05），表明PRSS1低表達后MGC803細胞的發(fā)生周期阻滯。
　　[結(jié)論]1.PRSS1蛋白在胃癌組織