siRNA干擾EMS1基因對MGC803細胞黏附的影響及機制研究.pdf

1、目的：本課題組前期利用基因芯片首次發(fā)現(xiàn)EMS1基因在胃癌中高表達，并已證實EMS1是胃癌細胞增殖、侵襲和遷移的關鍵分子。本實驗目的在于檢測siRNA抑制EMS1表達對MGC803細胞黏附能力的影響，并探討其具體分子機制。
　　方法：
　　1.通過MGC803細胞-HUVEC黏附實驗、細胞基質黏附實驗檢測抑制EMS1表達后MGC803細胞的黏附能力。
　　2.采用4×44K人全基因組寡核苷酸微陣列芯片技術比較分析正常 M

2、GC803細胞與干擾EMS1表達后MGC803細胞基因表達的差異，篩選出fold change>=2的基因為表達上調基因和fold change<=0.5為表達下調基因。
　　3.運用實時定量PCR和Western Blotting驗證基因芯片結果。
　　4.利用基因分析軟件對篩選出的差異表達基因進行功能分析。
　　結果：
　　1. MGC803細胞-HUVEC黏附實驗結果顯示MGC-803-EMS1細胞組與HU

3、VEC的黏附能力明顯比MGC803細胞和MGC-803-NEU細胞組低（P<0.05）。
　　2. MGC803細胞基質黏附實驗表明MGC-803-EMS1細胞組黏附能力比MGC803細胞和MGC-803-NEU細胞組低（P<0.05）。
　　3.基因芯片根據(jù)fold change>=2.0或<=0.5篩選出3434個差異表達基因，其中3052個屬于Homo sapiens，包括842個上調基因和2210個下調基因。

4、　　4.實時定量 PCR檢測結果顯示：經(jīng)內參校正后，與正常 MGC803細胞相比，VEGFC和ILK在MGC-803-EMS1組表達下調。
　　5. Western Blotting結果表明：ILK在MGC-803-EMS1組表達明顯降低，而 PAK1在兩組細胞中表達沒有差異。
　　6.差異表達基因的生物信息學分析
　　利用DAVID、PATHWAY及GO分類等生物信息學軟件綜合對差異表達基因進行生物學功能分析及預測，

5、上調基因 FZR1, CDC2L1, PMF1主要參與“cell cycle”,“mitosis”等生物學過程，下調基因 ITGAE, ITGAV, ILK, CEACAM1, ADAM33, ADAMTS10, ITGA6, DOCK1, MYH9, DST, ITGA2等基因與integrin-mediated signaling pathway”等腫瘤相關信號通路密切相關，其中CTNNB1, COL13A1, ADAM8, ICA

6、M2, NPHP1與cell-cell adhesion過程有關。TGAV, ECM2, COL13A1, ILK, ITGA6, EPDR1, COL17A1, NID2, ITGA2, FBLN5與cell-matrix adhesion有關。SKP2, VEGFC, RAF1, FGF2, CSF1R, CYR61, BUB3, NASP, ILK等參與cell proliferation過程。
　　結論：
　　EMS