利用小分子化合物誘導人胚胎干細胞形成角膜上皮樣細胞的生物學特性研究.pdf

1、目的:利用人胚胎干細胞具有多向分化潛能的特性，使用小分子化合物特異性作用于調節(jié)表皮外胚層及角膜上皮細胞分化發(fā)育過程中重要信號通路的某些調控位點，結合β-FGF，誘導人胚胎干細胞向角膜上皮樣細胞方向分化，以獲得角膜上皮樣細胞。
　　方法:懸滴法培養(yǎng)人胚胎干細胞，獲得具有向三個胚層分化潛能的擬胚體(Embryonic bodies，EBs)。將獲得的擬胚體于3D培養(yǎng)體系中懸浮培養(yǎng)，利用小分子化合結合β-FGF，誘導擬胚體逐步向外胚層、

2、表皮外胚層、角膜上皮樣細胞方向分化。懸浮培養(yǎng)4天后轉為貼壁培養(yǎng)，利用貼壁誘導培養(yǎng)條件及不同種類誘導培養(yǎng)基，進一步誘導細胞向角膜上皮樣細胞方向分化。分別于誘導第10、20、30天取材，從基因水平、細胞水平檢測Oct4、p63、pax6、K12、K14表達水平，判斷各組分化程度及分化效率。
　　結果:小分子化合物可下調干細胞標記物表達水平，上調角膜上皮樣細胞相關標記物表達水平;小分子化合物可誘導人胚胎干細胞向角膜上皮樣細胞方向分化;小

3、分子化合物結合不同誘導培養(yǎng)基在不同誘導階段調控基因表達水平效率不同。
　　結論:小分子化合物聯合β-FGF，通過特異性阻斷Wnt、TGF-β信號通路，可誘導人胚胎干細胞向角膜上皮樣細胞方向分化。在誘導分化過程中，干細胞標記基因表達水平下調，角膜上皮細胞發(fā)育調控基因及角膜上皮細胞特征性標記基因表達水平上調。與基礎培養(yǎng)基組（陰性對照組）、基礎培養(yǎng)基-誘導培養(yǎng)基組（陽性對照組）、誘導培養(yǎng)基-誘導培養(yǎng)基組（陽性對照組）相比，小分子化合物誘