黑色素瘤荷瘤小鼠脾臟T細胞亞群的動態(tài)檢測及其意義.pdf

1、目的:監(jiān)測黑色素瘤荷瘤小鼠脾臟T細胞亞群隨時間的數(shù)量變化，可為評估臨床腫瘤患者的免疫狀態(tài)、判斷腫瘤復(fù)發(fā)、病人預(yù)后、以及臨床療效提供依據(jù)，評估預(yù)后有重要的臨床意義。
　　 方法:從120只條件均等的健康小鼠中選出6只正常小鼠作為基礎(chǔ)值測定，其余114只小鼠隨機平分為2組，荷瘤組（A組，57只）和空白(PBS)組（B組，57只）。于發(fā)現(xiàn)出瘤當(dāng)天(D0)，從A組隨機選取5只測量并繪制腫瘤生長曲線。對于A組剩余小鼠和B組小鼠，自D0當(dāng)日

2、(含D0)開始，每隔5天各隨機選出6只小鼠處死、取脾，制備單細胞懸液，行流式細胞(FACS)檢測，確定CD3+T、CD4+T、CD8+T、初始T細胞在脾淋巴細胞懸液中所占比例，及CD4+T/CD8+T比值，直至荷瘤曲線觀測組小鼠或A組剩余小鼠中出現(xiàn)半數(shù)以上死亡時結(jié)束觀察。
　　 結(jié)果:
　　 1CD3+T淋巴細胞所占比例的動態(tài)變化:①空白組與荷瘤組相比，在D0(U=4.500P＜0.05)、D5(U=0.000P＜0.0

3、5)、D10(U=0.000P＜0.05)、D15(U=0.000P＜0.05)、D20(U=0.000P＜0.05)、D25(U=0.000P＜0.05)之間均存在統(tǒng)計學(xué)差異，表明CD3+T的數(shù)量隨荷瘤天數(shù)的延長，空白組明顯高于荷瘤組;②空白組內(nèi)，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25之間有統(tǒng)計學(xué)差異(F=4.960P=0.001)，其中正常小鼠、D0、D5、D10、D15分別與D20、D25有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)

4、，正常、D0、D5、D10、D15相互之間，D20與D25之間差異均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)，表現(xiàn)CD3+T淋巴細胞的數(shù)量在D0和D15之間基本不變，為64.7，D15之后CD3+T淋巴細胞的數(shù)量隨時間呈下降趨勢，以17.6％的下降率降為D25時的53.4。③荷瘤組內(nèi)，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25相互之間有統(tǒng)計學(xué)差異(F=3397.196P＜0.05)，其中任何兩者之間均有差異(P＜0.05)，表現(xiàn)CD3+T淋

5、巴細胞數(shù)量隨時間呈下降趨勢，由D0時的61.6，降為D25時的7.9，下降率為87.2％。
　　 2CD4+T淋巴細胞所占比例的動態(tài)變化:①空白組與荷瘤組相比，于D0時無統(tǒng)計學(xué)差異（t=-0.036P=0.972），D5、D10、D15、D20、D25均有統(tǒng)計學(xué)差異(t=-14.933P＜0.05、U=0.000P＜0.05、t=-37.860P＜0.05、U=0.000P＜0.05、U=0.000P＜0.05)，表明CD4+T

6、的數(shù)量隨時間延長，空白組明顯高于荷瘤組;②空白組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25之間有統(tǒng)計學(xué)差異（F=3397.196P＜0.05），其中正常小鼠、D0、D5、D10、D15與D20、D25分別相比，均有統(tǒng)計學(xué)差異存在(P＜0.05)，D20、D25之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，正常、D0、D5、D10、D15之間差異均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)，提示CD4+T淋巴細胞數(shù)量在D0和D15之間基本不變，為38.

7、7，D15之后才以27.9％的下降率降為D25時的27.9;③荷瘤組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25之間有統(tǒng)計學(xué)差異（F=160.370P＜0.05），其中正常小鼠、D0分別與D5、D10、D15、D20、D25相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，正常小鼠與D0之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示CD4+T淋巴細胞數(shù)量在D0之后出現(xiàn)下降趨勢，由D0時的38.9降為D25時的3.1，下降率為92.0％。

8、>　　 3CD8+T淋巴細胞所占比例的動態(tài)變化:①空白組與荷瘤組相比，于D0時無統(tǒng)計學(xué)差異（t=0.645P=0.533），D5、D10、D15、D20、D25差異顯著(U=3.000P＜0.05、U=0.000P＜0.05、t=-8.131P＜0.05、t=-16.059P＜0.05、U=3.000P＜0.05)，表明CD8+T淋巴細胞的數(shù)量隨時間延長，空白組明顯高于荷瘤組;②空白組中，不同時間的CD8+T的數(shù)量差異無統(tǒng)計意義(F=

9、0.434P=0.851)，表明隨時間延長，趨勢比較平穩(wěn)，CD8+T淋巴細胞的數(shù)量由D0時的21.6降為D25時的20.5，下降率僅為5.1％。③荷瘤組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25有統(tǒng)計學(xué)差異（F=76.815P＜0.05），其中正常小鼠、D0分別與D5、D10、D15、D20、D25相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，D5、D10分別與D15、D20、D25相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);正常、D0二者

10、之間、D5、D10二者之間、D15、D20、D25相互之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，表明CD8+T淋巴細胞的數(shù)量隨時間延長，呈下降趨勢，且D25時為最低值，由D0時的22.2降為D25時的5.2，下降率為76.6％。
　　 4CD4+T/CD8+T比值的變化:①空白組與荷瘤組相比，于D0時無統(tǒng)計學(xué)差異（U=12.500P=0.363），D5、D10、D15、D20、D25差異顯著(U=0.000P＜0.05、t=-16.97

11、1P＜0.05、t=-16.483P＜0.05、t=-12.562P＜0.05、U=0.000P＜0.05），說明隨著時間的延長，空白組CD4+T/CD8+T比值明顯高于荷瘤組;②空白組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25有統(tǒng)計學(xué)差異（F=7.128P＜0.05），其中正常小鼠、D0、D5、D10、D15之間分別與D20、D25相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，D20、D25相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，正常、D

12、0、D5、D10、D15之間差異均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)，說明CD4+T/CD8+T比值在D0到D15的范圍內(nèi)，保持1.8不變，從D15以后，該值以22.2％的下降率降為D25時的1.4;③荷瘤組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25總的來說有統(tǒng)計學(xué)差異(F=97.348P＜0.05)，其中正常、D0分別與D5、D10、D15、D20、D25之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，正常小鼠與D0無顯著性差異(P＞0.05

13、)，D5、D10、D15、D20、D25之間差異不明顯(P＞0.05)，提示該比值逐漸下降，甚至倒置，從D0時的1.8降為D25時的0.6。
　　 5初始T細胞所占比例動態(tài)變化:①空白組與荷瘤組相比，于D0時無統(tǒng)計學(xué)差異（t=-0.200P=0.846），D5、D10、D15、D20、D25差異顯著(U=0.000P＜0.05、U=0.000P＜0.05、t=-18.543P＜0.05、U=0.000P＜0.05、U=0.000

14、P＜0.05)，可以認為，初始T淋巴細胞的數(shù)量隨時間逐漸延長，空白組明顯高于荷瘤組;②空白組中，正常小鼠、D0、D5、D10、D15、D20、D25之間存在差異（F=8.865P＜0.05），其中正常、D0、D5、D10、D15分別與D20、D25相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，D20與D25相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，正常、D0、D5、D10、D15之間差異不顯著(P＞0.05)，說明初始T細胞的數(shù)量在D0和D15之間，由34

15、.1下降到32.2，下降率僅為+5.4％;該比例在D15至D25之間，由32.2減少為21.7，下降率為32.6％;③荷瘤組中，正常、D0、D5、D10、D15、D20、D25有統(tǒng)計學(xué)差異(F=178.995P＜0.05)，其中任何兩者之間均有差異(P＜0.05)，提示初始T淋巴細胞數(shù)量隨時間呈下降趨勢，從D0時的34.1降為D25時的2.5，下降率為92.7％。
　　 結(jié)論:
　　 1荷瘤組小鼠，隨時間推移（D0到D2

16、5），其脾臟中CD3+T、CD4+T、CD8+T占脾淋巴細胞懸液百分率都呈下降趨勢，且三者的下降幅度（下降率）排序為:CD4+T淋巴細胞＞CD3+T淋巴細胞＞CD8+T淋巴細胞;CD4+T/CD8+T下降趨勢明顯，表明黑色素腫瘤逐漸生長，小鼠的免疫功能逐漸下降;同時，初始T細胞比例也大幅下降。
　　 2空白組小鼠，隨時間推移（D0到D25），CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞占脾淋巴細胞懸液百分率都呈現(xiàn)先

17、保持相對穩(wěn)定后逐漸下降的趨勢，D15為這些比例由穩(wěn)定跨向下降的轉(zhuǎn)折時間點，三者后期（D15以后）的下降幅度（下降率）排序為:CD4+T淋巴細胞＞CD3+T淋巴細胞＞CD8+T淋巴細胞;CD4+T/CD8+T先保持相對穩(wěn)定，D15后呈現(xiàn)明顯的下降趨勢;同時，初始T細胞比例也呈現(xiàn)先保持相對穩(wěn)定，D15后才大幅下降的趨勢。
　　 3荷瘤組與空白組小鼠相比，二者的CD3+T、CD4+T、CD8+T、初始T細胞在脾淋巴細胞懸液中所占比例，