人白細(xì)胞介素6基因啟動(dòng)子報(bào)告載體的構(gòu)建及作用檢測(cè).pdf

1、本文對(duì)人白細(xì)胞介素6基因啟動(dòng)子報(bào)告載體的構(gòu)建及作用進(jìn)行了探討。文章以雌激素對(duì)IL-6基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用為切人點(diǎn)，構(gòu)建了人IL-6基因啟動(dòng)子報(bào)告載體，并與人雌激素受體表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染小鼠成骨樣細(xì)胞，檢測(cè)了雌激素作用和IL-1誘導(dǎo)對(duì)這一報(bào)告載體轉(zhuǎn)錄活性的影響。研究表明，人IL-6基因啟動(dòng)子分析人IL-6基因的翻譯起始點(diǎn)位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)下游第63個(gè)堿基處，其啟動(dòng)子區(qū)域存在CREB、C/EBP和NF-κB等重要的反應(yīng)元件；人IL-6基因啟動(dòng)子螢光素酶

2、報(bào)告載體的構(gòu)建PCR擴(kuò)增了人IL-6基因啟動(dòng)子，產(chǎn)物長(zhǎng)度為222bp(-176～+46)。通過(guò)T-A克隆和亞克隆依次構(gòu)建了人IL-6基因啟動(dòng)子的克隆載體(pMD18sim-hIL6)和螢光素酶報(bào)告載體(pGL3-hIL6)；雌激素處理抑制IL-1β誘導(dǎo)下pGL3-hIL6報(bào)告載體的轉(zhuǎn)錄活性在共轉(zhuǎn)染HEO的MC3T3-E1細(xì)胞中，IL-1β(5ng/ml)處理使pGL3-hIL6大量表達(dá)，而加入不同濃度的17β-E2(10-6、10-8和