阿斯匹林在巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板過程中的作用的研究.pdf

1、目的：Meg-01細(xì)胞是體外研究巨核細(xì)胞的一個經(jīng)典模型，用佛波酯（TPA）誘導(dǎo)巨核細(xì)胞株Meg-01細(xì)胞成熟，研究阿斯匹林在巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板過程中的作用，為臨床研究阿斯匹林抵抗現(xiàn)象提供一些理論基礎(chǔ)。 方法：取對數(shù)生長期Meg-01細(xì)胞，細(xì)胞密度3×105/ml接種于六孔板中，無血清培養(yǎng)18h后，以終濃度為10-7mol/LTPA誘導(dǎo)Meg-01細(xì)胞3天，對照組加等量RPMI-1640培養(yǎng)基。誘導(dǎo)3天后，棄培養(yǎng)基，PBS沖洗3次

2、，按0、1.25、2.5、5.0、12.5、25mg/L五個濃度加入阿斯匹林，單純TPA誘導(dǎo)組加等量RPMI-1640培養(yǎng)基，5％CO2、37℃培養(yǎng)24小時。24小時后顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，檢測巨核細(xì)胞凋亡（TUNEL），caspase3和Bcl-2表達(dá)（Western blot），GPⅡb和GPⅢamRNA的變化（RT-PCR）。 結(jié)果： 1.10.7mol/L的TPA誘導(dǎo)Meg-01細(xì)胞三天后，與對照組相比，TP

3、A誘導(dǎo)后的巨核細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化，細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化。 2.阿斯匹林作用于TPA誘導(dǎo)后的巨核細(xì)胞24h后，與單純TPA誘導(dǎo)組相比，各處理組巨核細(xì)胞骨架發(fā)生了明顯變化，巨核細(xì)胞胞質(zhì)延伸加劇，在培養(yǎng)基中懸浮著少量血小板大小的粒子。 3.巨核細(xì)胞凋亡：單純TPA誘導(dǎo)組與各阿斯匹林處理組均出現(xiàn)不同程度的凋亡，各處理組的凋亡率均大于單純TPA誘導(dǎo)組（均為P<0.01），并且隨著阿斯匹林濃度升高，處理組的凋亡率依次升高（均為

4、P<0.01）。 4.caspase3和bcl-2表達(dá)：各阿斯匹林處理組有活性的caspase3表達(dá)量均高于單純TPA誘導(dǎo)組（均為P<0.01），且隨著阿斯匹林濃度升高，有活性的caspase3蛋白表達(dá)量高于前幾個濃度（均為P<0.05）。Bcl-2表達(dá)量均低于單純TPA誘導(dǎo)組（均為P<0.01），且隨著阿斯匹林濃度升高，Bcl-2表達(dá)量低于前幾個濃度（均為P<0.05）。 5.GPⅡb和GPⅢamRNA的表達(dá)：各阿斯匹