開(kāi)口箭皂苷提取優(yōu)化及其對(duì)關(guān)節(jié)炎小鼠的治療研究.pdf

1、百合科鈴蘭族開(kāi)口箭屬開(kāi)口箭中含有多種生物活性成分，這些生物活性成分都具有許多生物功能，其中最主要的成分是甾體皂苷，甾體皂苷已被證明具有抗炎、抗腫瘤、祛痰和鎮(zhèn)痛等多種作用。因此對(duì)皂苷的提取方法進(jìn)行探討優(yōu)化，獲取最佳提取工藝是很有意義的。然而皂苷的提取方法仍不夠完善，需要進(jìn)一步進(jìn)行探索，本實(shí)驗(yàn)就采用了多種處理方法相結(jié)合的方式探討了皂苷的最佳獲取工藝，為皂苷的提取優(yōu)化提供了參考。
　　類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬于疑難雜癥之一，西藥治療該疾病存在著

2、成本高、副作用大等缺點(diǎn)，中藥治療就逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。開(kāi)口箭中的皂苷在抗炎方面也具有相應(yīng)的療效，本實(shí)驗(yàn)就研究了用我們所探討的最佳皂苷提取工藝所獲取的皂苷對(duì)關(guān)節(jié)炎小鼠的治療效果。該研究為開(kāi)口箭皂苷在關(guān)節(jié)炎癥治療方面打下了鋪墊，為開(kāi)口箭皂苷最終應(yīng)用于人類(lèi)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究先用物理和化學(xué)方法鑒定了開(kāi)口箭的主要生物活性成分，得知開(kāi)口箭中含有甾體皂苷、黃酮類(lèi)物質(zhì)、生物堿和揮發(fā)油類(lèi)成分，而不含酚類(lèi)和鞣質(zhì)以及蒽醌類(lèi)

3、物質(zhì)。
　　隨后又對(duì)開(kāi)口箭皂苷的提取方法進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)首先分別用雙蒸水(DDW)溶解開(kāi)口箭粉末或95％乙醇溶解開(kāi)口箭粉末，然后又用電磁爐加熱法、微波爐加熱法或超聲波破碎法對(duì)開(kāi)口箭溶解液進(jìn)行處理，接著用石油醚萃取法或乙醚萃取法進(jìn)行脫脂萃取，最后都用水飽和正丁醇進(jìn)行深度萃取，從而獲得開(kāi)口箭總皂苷成分，然后觀察、分析和比較了這幾種方法的提取效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:DDW溶解開(kāi)口箭粉末比95％乙醇溶解開(kāi)口箭粉末獲取的總皂苷含量多，微波爐加熱

4、比超聲波破碎最終獲得的總皂苷含量多，超聲波破碎比電磁爐加熱獲取的總皂苷含量多。石油醚萃取比乙醚萃取效果好。由此表明最佳提取工藝為:用DDW溶解開(kāi)口箭粉末，用微波爐加熱處理開(kāi)口箭水溶液，用石油醚進(jìn)行脫脂萃取，最后用水飽和正丁醇再次萃取。
　　本研究最后用第三章優(yōu)化的皂苷提取流程所提取的皂苷研究了其對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠的治療效果。實(shí)驗(yàn)設(shè)有正常組、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型組和開(kāi)口箭皂苷治療組，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始成功用雞蛋清卵蛋白初次免疫，隨后又用弗式不

5、完全佐劑乳化的雞蛋清卵蛋白再次免疫建立起了關(guān)節(jié)炎模型，隨后又用開(kāi)口箭皂苷溶液進(jìn)行灌胃處理，濃度為0.3 g/mL，劑量為20 mL/kg，一天一次，連續(xù)進(jìn)行兩周，期間對(duì)小鼠的形態(tài)進(jìn)行了觀察，并在治療后測(cè)量、比較和分析了不同組小鼠后爪的體積，最后對(duì)3組小鼠的關(guān)節(jié)部位進(jìn)行蘇木精-伊紅染色(HE)和抗TNFα免疫組化(IHC)實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，關(guān)節(jié)炎小鼠表現(xiàn)出入類(lèi)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)癥狀，如:爪子腫脹、畸形和活動(dòng)能力減弱等，關(guān)節(jié)炎組小鼠

6、后爪的體積與正常組小鼠相比有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，開(kāi)口箭皂苷治療組小鼠與關(guān)節(jié)炎小鼠后爪體積相比有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。HE實(shí)驗(yàn)表明，開(kāi)口箭皂苷治療后的小鼠滑膜增生明顯減輕，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)接近正常。IHC實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)開(kāi)口箭皂苷治療后的小鼠滑膜顏色比關(guān)節(jié)炎小鼠顏色淺，TNFα的含量比關(guān)節(jié)炎小鼠低。以上研究為開(kāi)口箭皂苷對(duì)小鼠關(guān)節(jié)炎的治療提供了參考，并為進(jìn)一步深入研究打下了鋪墊。
　　綜上所述:開(kāi)口箭中含有多種生物活性成分，例如:甾體皂苷、黃酮類(lèi)物質(zhì)、生