基于磁分離與質(zhì)譜法的癌癥相關(guān)核酸分析方法研究.pdf

1、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)的很多研究成果顯示很多嚴(yán)重疾病的發(fā)生與基因突變密切相關(guān)，如癌癥和遺傳病等。由此可見，特定序列DNA的檢測(cè)分析在病原基因的測(cè)定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有非常重大的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。近年來，一系列快速可靠的特定序列DNA檢測(cè)技術(shù)得以迅速發(fā)展，核酸檢測(cè)目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、臨床診斷學(xué)等諸多領(lǐng)域。本論文以質(zhì)譜為檢測(cè)手段，利用磁珠的富集分離特性，再結(jié)合核酸放大技術(shù)等有效方法，發(fā)展了一些列癌癥相關(guān)DNA序

2、列的分析檢測(cè)方案，主要包括以下幾部分內(nèi)容：
　　TK1 mRNA與細(xì)胞分裂相關(guān)，它是腫瘤生長(zhǎng)的一種重要的標(biāo)志物。鑒定其在活體細(xì)胞內(nèi)基因水平的變化對(duì)于理解生物學(xué)過程和疾病機(jī)制有重要的價(jià)值，對(duì)于癌癥的檢測(cè)、預(yù)防和治療也越來越不可或缺。在第2章中，我們發(fā)展了一種基于鑭系離子標(biāo)記的等溫雜交鏈擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)TK1 mRNA的新方法，鑒于HCR方法的優(yōu)勢(shì)和稀土離子標(biāo)記DNA的可行性，本課題以HCR信號(hào)擴(kuò)增為基礎(chǔ)、結(jié)合稀土標(biāo)記的DNA之間互補(bǔ)雜交

3、的作用原理以及利用ICP-MS的高靈敏檢測(cè)來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的靈敏檢測(cè)。該檢測(cè)平臺(tái)主要包括如下幾個(gè)方面的工作:
　　1.參照已有文獻(xiàn)報(bào)道的合成方法實(shí)現(xiàn)稀土離子標(biāo)記DNA探針。
　　2.利用磁納米顆粒的富集分離作用和HCR信號(hào)擴(kuò)增方法實(shí)施檢測(cè)目標(biāo)DNA的方案。
　　3.用ICP-MS檢測(cè)樣品中稀土離子強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的間接檢測(cè)。本方法綜合利用了HCR無酶恒溫信號(hào)放大、核酸適體的高特異性及ICP-MS靈敏度高、分辨率

4、高、穩(wěn)定性好和抗干擾性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA序列的特異性檢測(cè)。
　　DNA甲基化是參與基因調(diào)控的一種重要表觀遺傳機(jī)制，它可以通過影響DNA構(gòu)象、穩(wěn)定性和與蛋白質(zhì)相互作用等方式實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，CpG島的甲基化可能是最早研究的發(fā)生在多種癌癥中的體細(xì)胞基因組改變之一。很多科學(xué)家報(bào)道了不同癌癥中發(fā)生的甲基化異?，F(xiàn)象，它已成為多種腫瘤診斷的生物標(biāo)志物之一，因此DNA甲基化的分析對(duì)于了解表觀遺傳學(xué)的影響至關(guān)重要。在第3章中，我們借助于磁