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文檔簡介
1、背景:
血小板輸注通常運用于治療或者預防出血的血液疾病中,在這些血液疾病中,尤其以原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)更為突出。其為一種復雜的多種機制共同參與的獲得性自身免疫性疾病。該疾病的發(fā)生是由于患者對自身血小板抗原的免疫失耐受,產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫介導的血小板過度破壞和血小板生成受抑,出現(xiàn)血小板減少,伴或者不伴發(fā)皮膚黏膜出血的臨床表現(xiàn)[1]。ITP的發(fā)病率約5-10/10萬人口,男女發(fā)病率相近,育齡期女性發(fā)病率高于同年齡段
2、男性,60歲以上人群的發(fā)病率為60歲以下人群的2倍[2]。在治療的過程中,臨床發(fā)現(xiàn)有一部分患者在運用一線治療(糖皮質(zhì)激素,靜脈靜注丙種球蛋白)甚至是脾臟切除后,患者的病情仍然沒有得到緩解,時刻存在著內(nèi)臟出血甚至是顱內(nèi)出血的風險。而在這些常規(guī)治療仍然得不到緩解的患者體內(nèi)可檢測出特異性自身抗體(抗GPIbα抗體或者抗GPⅡbⅢa抗體),目前公認的ITP發(fā)病機制認為體內(nèi)存在這些抗體的患者血小板通過巨噬細胞中的Fcγ受體結(jié)合,最終在脾臟中被清除
3、。但是最新理論猜測在神經(jīng)酰胺酶的作用下血小板膜表面上的糖蛋白(主要GPIbα)發(fā)生脫糖現(xiàn)象,糖蛋白上β-N-乙?;?D-葡糖胺(βGN)聚集和和半乳糖殘基暴露,脫糖后的糖蛋白與肝臟枯否細胞上αMβ2整聯(lián)蛋白以及肝臟細胞Ashwell-Morell受體結(jié)合,最終在肝臟中被清除[3,4,5]。
目的:
本課題首先選擇正常成年人為對象,分析不同溫度及不同時間點對血小板的脫糖是否有影響,從而建立最佳的測定血小板脫糖實驗方法。
4、待實驗方法確立后,運用其測定ITP患者的脫糖水平(RCA%、ECL%)。其次運用單克隆抗體俘獲血小板抗原(MAIPA)方法測定ITP患者的特異性自身抗體。最后,將ITP患者脫糖水平與ITP患者特異性自身抗體指標聯(lián)合,探討作為ITP患者檢測新指標的可行性以及ITP新型藥物治療研究的價值。
方法:
隨機選擇我院體檢中心正常成年人20例,在4℃及25℃條件下,0、4、8、24h這4個時間點下,運用流式細胞儀檢測20例正常人
5、不同溫度和不同時間點下的脫糖水平。待最佳檢測方法確立后,檢測20例ITP患者的脫糖水平,20例患者分為一線常規(guī)治療有效組及治療無效組,分組標準為2012版成人原發(fā)免疫性血小板減少癥診治的中國專家共識:完全反應(CR),治療以后 PLT≥100×109/L且沒有出血;有效(R),治療以后 PLT≥30×109/L且比治療前血小板數(shù)目增加2倍,同時沒有出血;無效(NR),治療以后PLT<30×109/L或者治療后血小板數(shù)目增加不到治療前的2
6、倍或者仍然存在出血。本實驗中將完全反應與有效同時歸屬于一線治療有效組,無效歸屬于一線治療無效組。同時選取我院血液科2013.10~2014.10中29例ITP患者血液標本,運用單克隆抗體俘獲血小板抗原(MAIPA)方法檢測患者特異性自身抗體(抗GPIbα抗體和抗GPⅡbⅢa抗體)。
結(jié)果:
1)不同溫度不同時間點下20例正常人的脫糖水平(RCA%、ECL%):在4℃及25℃下,運用Kruskal-Wallis秩和檢驗
7、分別比較各自溫度下4時間點的脫糖水平,4℃下4時間點之間的脫糖水平差異有統(tǒng)計學意義,25℃條件下4時間點之間比較,4時間點脫糖水平差異均無統(tǒng)計學意義。4℃下,4時間點之間運用Wilcoxon秩和檢驗進行兩兩相互比較時,24h與其他3時間點比較時,差異均有統(tǒng)計學意義。25℃下運用相同方法進行兩兩相互比較,4時間點之間相互比較差異均無統(tǒng)計學意義。在不同溫度相同時間點之間運用Wilcoxon秩和檢驗進行相互比較時,4℃4h與25℃4h之間,4
8、℃8h與25℃8h之間,脫糖水平RCA%差異均有統(tǒng)計學意義。而其他兩兩相互比較時,脫糖水平(RCA%、ECL%)差異均無統(tǒng)計學意義。
2)20例ITP患者血小板脫糖水平(RCA%、ECL%):一線常規(guī)治療后,治療有效組及治療無效組的血小板脫糖水平RCA%分別為0.6(0.3,1.3),15.3(8.9,32.8);兩組血小板脫糖水平ECL%分別為0.6(0.2,1.7),1.8(1.1,6.3)。運用Wilcoxon秩和檢驗分
9、析上述前后兩組RCA%,差異有統(tǒng)計學意義。上述前后兩組ECL%相互比較,差異也有統(tǒng)計學意義。
3)29例ITP患者抗體檢測:運用單克隆抗體俘獲血小板抗原(MAIPA)方法檢測ITP患者抗GPIbα抗體和抗GPⅡbⅢa抗體,實驗結(jié)果顯示29例患者中,單一存在抗GPIbα抗體陽性患者3例,單一存在抗GPⅡbⅢa抗體陽性患者14例,抗體共陽性患者4例,抗體雙陰患者8例。
結(jié)論:運用流式細胞儀檢測血小板脫糖水平(RCA%、E
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