脫細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)移植物修復(fù)坐骨神經(jīng)缺損對(duì)脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元Bcl-2、Bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 周圍神經(jīng)損傷后，靶源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(NTFS)無法通過逆向運(yùn)輸?shù)竭_(dá)神經(jīng)元，神經(jīng)元會(huì)因缺少或喪失這些物質(zhì)的支持而發(fā)生凋亡，特別是出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。以往的研究著重于選擇有效的移植物，改善損傷微環(huán)境，以及靶組織分泌的神經(jīng)因子對(duì)神經(jīng)再生的趨化性和營養(yǎng)性等，而缺少移植物對(duì)相應(yīng)神經(jīng)元保護(hù)作用機(jī)制的研究。脫細(xì)胞神經(jīng)移植物作為有生物活性的神經(jīng)替代物，具有良好的仿生性和組織相容性，移植后為軸突再生提供適宜的微環(huán)境，能夠有效促進(jìn)神經(jīng)再

2、生。Bcl-2基因家族是迄今為止研究得最為深入和廣泛的凋亡調(diào)控基因之一。其中Bcl-2和Bax分別是主要的抗凋亡和促凋亡成員，它們通過調(diào)節(jié)線粒體的功能來調(diào)節(jié)凋亡。本實(shí)驗(yàn)建立脫細(xì)胞神經(jīng)移植物修復(fù)坐骨神經(jīng)缺損模型，通過免疫組織化學(xué)染色和Western Blot檢測凋亡指標(biāo)Bcl-2、Bax在相應(yīng)脊髓節(jié)段的表達(dá)，在基因和蛋白水平研究脫細(xì)胞神經(jīng)移植物對(duì)脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的保護(hù)作用。
　　 材料和方法：
　　 1、化學(xué)萃取脫細(xì)胞方

3、法制備脫細(xì)胞神經(jīng)移植物
　　 選用Wistar大鼠10只，經(jīng)過麻醉后取出雙側(cè)坐骨神經(jīng)，采用化學(xué)萃取方法制備脫細(xì)胞神經(jīng)移植物。制備的脫細(xì)胞大鼠坐骨神經(jīng)置入含100μg/ml慶大霉素和100μg/ml鏈霉素的PBS(PH7.4)液中，4℃下保存?zhèn)溆谩?br>　　 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組
　　 成年健康Wistar大鼠30只，體重200～250g，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。隨機(jī)分為三組，每組10只，正常組，實(shí)驗(yàn)組（脫細(xì)胞神經(jīng)

4、移植物橋接坐骨神經(jīng)缺損組），對(duì)照組（坐骨神經(jīng)缺損組）。
　　 3、取材和檢測
　　 動(dòng)物飼養(yǎng)1個(gè)月后，取各組相應(yīng)節(jié)段脊髓（L4-L6節(jié)段），進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和Western Blot檢測Bcl-2、Bax在脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、術(shù)后大鼠手術(shù)側(cè)后肢無法運(yùn)動(dòng)，拖地行走，并且出現(xiàn)足部皮膚紅腫或不同程度的潰瘍。術(shù)后1個(gè)月，各組大鼠手術(shù)側(cè)足部皮膚紅腫及潰瘍基本消退，實(shí)驗(yàn)組大鼠

5、術(shù)側(cè)后蹬有力，足趾稍能分開，步態(tài)趨于正常，對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)功能未見恢復(fù)。
　　 2、Bcl-2、Bax的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：Bcl-2、Bax陽性表達(dá)均定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色。正常組偶見Bcl-2、Bax陽性細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組的Bcl-2陽性細(xì)胞略多于對(duì)照組，而實(shí)驗(yàn)組的Bax陽性細(xì)胞卻少于對(duì)照組。
　　 3、Western Blot結(jié)果顯示：對(duì)照組Bcl-2較正常組表達(dá)減少，而實(shí)驗(yàn)組Bcl-2表達(dá)明顯增多；正常組Bax幾

6、乎不表達(dá)，對(duì)照組表達(dá)明顯增多，而實(shí)驗(yàn)組Bax表達(dá)減少。通過取Bcl-2/Bax的比值后結(jié)果顯示，對(duì)照組較正常組明顯下降(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、大鼠坐骨神經(jīng)缺損后相應(yīng)脊髓節(jié)段（L4-L6）內(nèi)存在神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，Bcl-2和Bax的陽性表達(dá)是神經(jīng)凋亡的重要指標(biāo)
　　 2、應(yīng)用脫細(xì)胞神經(jīng)移植物修復(fù)坐骨神經(jīng)缺損，可以通過影響B(tài)cl-2、Bax基因的表達(dá)，增加Bc