X射線致HT-29、HeLa、GLC-82細胞損傷過程中NADPH氧化酶的作用.pdf

1、目的：探討①2Gy X射線輻照使低射線敏感細胞HT-29，中射線敏感細胞HeLa,高射線敏感細胞GLC-82活性的變化。②NADPH氧化酶在X射線誘導HT-29、HeLa、GLC-82細胞損傷過程中的作用。 方法：①選用對數(shù)生長期生長良好的上述3種細胞株，將其分為對照組和2Gy X射線輻照組，MTT比色法檢測三種細胞存活分數(shù)的變化。②將上述3種細胞分為對照組、NADPH氧化酶抑制劑DPI處理組、12Gy X射線輻照組、NADPH

2、氧化酶抑制劑DPI處理聯(lián)合X射線輻照組四個組。用熒光分光光度計檢測細胞內(nèi)的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)變化；再將上述3種細胞分為對照組和12Gy X射線輻照組后，用免疫細胞化學和激光共聚焦顯微掃描術(shù)(Immunostaining and laser-scanning confocal microscopy)來研究NADPH氧化酶細胞膜亞基gp90phox胞質(zhì)亞基p47phox的“共定位”，用Weste

3、rn blotting來檢測NADPH氧化酶的關(guān)鍵亞基gp91phox輻照前后在細胞中表達量變化情況。 結(jié)果：①三種細胞經(jīng)X射線輻照后，細胞存活分數(shù)有明顯降低。②在經(jīng)12 Gy X射線輻照后細胞內(nèi)ROS明顯增加，在用NADPH氧化酶抑制劑處理后再輻照，則細胞內(nèi)ROS降低到未輻照水平；同時輻照后NADPH氧化酶細胞質(zhì)亞基’p47phox從細胞質(zhì)遷移到細胞膜上并和細胞膜亞基gp91phox結(jié)合； Western blotting檢測