建立真核細(xì)胞蛋白質(zhì)組合翻譯后修飾的質(zhì)譜分析方法.pdf

1、真核細(xì)胞內(nèi)源性蛋白質(zhì)翻譯后修飾與眾多重大疾病相關(guān)聯(lián)因而一直備受關(guān)注。破解藥物靶標(biāo)的翻譯后修飾密碼為藥物設(shè)計(jì)開(kāi)辟了新的思路。翻譯后修飾使蛋白的結(jié)構(gòu)變得更加復(fù)雜，功能更加多樣，調(diào)節(jié)更加細(xì)化，作用更加特異。通過(guò)系統(tǒng)鑒定與疾病相關(guān)的靶標(biāo)蛋白中翻譯后修飾類(lèi)型及其修飾位點(diǎn)，比較病理狀態(tài)下靶標(biāo)蛋白翻譯后修飾水平與正常狀態(tài)中蛋白修飾水平的差異，檢測(cè)藥物處理后靶標(biāo)蛋白翻譯后修飾水平的變化，或許能從另一角度更深入透徹的理解疾病致病機(jī)理，促進(jìn)藥物研發(fā)。然而對(duì)

2、翻譯后修飾的確定一直存在諸多困難。伴隨生物質(zhì)譜技術(shù)的不斷完善，它逐漸成為蛋白質(zhì)翻譯后修飾鑒定的最有力的方法之一。微管蛋白是抗癌類(lèi)藥物的一種重要靶標(biāo)蛋白，與其相關(guān)的藥物很多，最具代表性的是紫杉醇，它具有聚合和穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)微管的作用。
　　本研究以我們把人源細(xì)胞系中表達(dá)的微管蛋白作為研究對(duì)象，依托WatersSNAPT HDMS系統(tǒng)對(duì)其多種翻譯后修飾進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。通過(guò)對(duì)樣品前處理過(guò)程的改進(jìn)，對(duì)后續(xù)色譜質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)的優(yōu)化，對(duì)所獲的質(zhì)譜分析

3、數(shù)據(jù)的可信度驗(yàn)證篩選原則的完善，建立了一套適用于真核細(xì)胞內(nèi)源性蛋白翻譯后修飾鑒定的最優(yōu)化分析流程。利用這套建立的真核蛋白翻譯后修飾質(zhì)譜分析流程，我們對(duì)模式蛋白的多種翻譯后修飾進(jìn)行了最系統(tǒng)全面準(zhǔn)確的鑒定。在完善翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定流程的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步探索建立非標(biāo)記和標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法，以期對(duì)蛋白翻譯后修飾水平進(jìn)行相對(duì)定量比較。
　　總體來(lái)說(shuō)，我們建立了一整套用于真核細(xì)胞內(nèi)源性蛋白翻譯后修飾類(lèi)型和修飾位點(diǎn)鑒定、修飾水平監(jiān)測(cè)的分析