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文檔簡介
1、目的:研究香煙煙霧的重要成分苯并[a]芘(BaP)對C57BL/6N小鼠腹主動脈瘤(AAA)形成的影響,探討B(tài)aP在小鼠腹主動脈瘤發(fā)病過程中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
方法:48只7-9月齡,雄性,C57BL/6N小鼠分為四組:對照組:腹腔注射中鏈甘油三酯5ml/kg體重,每周一次。AngⅡ組:背部植入AngⅡ微量滲透泵(AngⅡ溶于無菌生理鹽水,每只泵均注入168μL的AngⅡ溶液,放置于37℃水浴箱中12小時備用,藥物緩釋泵
2、持續(xù)釋放AngⅡ0.72mg/kg/day,釋放速度0.25μL/hr,持續(xù)4周),同時腹腔注射中鏈甘油三酯5ml/kg體重,每周一次。BaP組:將BaP以10mg/kg體重的劑量溶解于中鏈甘油三酯,配成2mg/ml的溶液,以5ml/kg體重進(jìn)行腹腔注射,每周一次。AngⅡ/BaP復(fù)合物組:背部植入AngⅡ微量滲透泵,同時腹腔注射溶解了BaP的中鏈甘油三酯,劑量及方法同前。處理5周后取各組小鼠腹主動脈觀察大體標(biāo)本形態(tài);切片行HE染色觀察
3、血管結(jié)構(gòu),masson染色觀察血管壁膠原纖維改變情況;圖像分析儀檢測各小鼠腹主動脈最大周長及各組小鼠腹主動脈平均血管周長。采用免疫組織化學(xué)法檢測各組腹主動脈巨噬細(xì)胞侵潤,MMP-2、MMP-9、MMP-12、NF-κ B的表達(dá)結(jié)果;TUNEL-POD法檢測血管壁平滑肌細(xì)胞凋亡情況。
結(jié)果:
1.處理5周后取各組小鼠腹主動脈,大體標(biāo)本顯示AngⅡ組、AngⅡ/BaP復(fù)合組有腹主動脈瘤形成。AngⅡ/BaP復(fù)合物
4、組腹主動脈瘤形成率為41.67%明顯高于AngⅡ組腹主動脈瘤形成率25%(P<0.05),實(shí)驗(yàn)過程中AngⅡ/BaP復(fù)合物組一只小鼠出現(xiàn)AAA破裂。
2.各組腹主動脈(瘤)標(biāo)本切片,HE染色顯示AngⅡ/BaP復(fù)合組動脈瘤破裂處彈性纖維紊亂,血管中膜顯著變薄,血管壁局部向外膨出;masson染色顯示AngⅡ/BaP復(fù)合物組血管壁膠原纖維丟失明顯。圖像分析儀檢測:AngⅡ/BaP復(fù)合物組腹主動脈平均周長(1.40±0.25)
5、 mm,明顯大于AngⅡ組腹主動脈平均周長(1.2±0.23)mm,P<0.05。
3.免疫組織化學(xué)法檢測顯示小鼠腹主動脈壁巨噬細(xì)胞的侵潤在AngⅡ/BaP復(fù)合物組(0.56±0.12)與AngⅡ組(0.27±0.08)比較,明顯增多,P<0.05。AngⅡ/BaP復(fù)合物組小鼠腹主動脈壁MMP-2表達(dá)(0.47±0.13),MMP-9表達(dá)(0.49±0.14),MMP-12表達(dá)(0.49±0.11),NF-κB表達(dá)(0.4
6、2±0.12)與AngⅡ組小鼠腹主動脈壁MMP-2表達(dá)(0.25±0.06),MMP-9表達(dá)(0.24±0.09),MMP-12表達(dá)(0.24±0.09),NF-κB表達(dá)(0.23±0.06)比較明顯增加,兩組各檢測指標(biāo)相比P值均小于0.05。
4.TUNEL-POD法檢測各組小鼠腹主動脈壁平滑肌細(xì)胞凋亡情況,結(jié)果顯示AngⅡ/BaP復(fù)合物組血管壁平滑肌細(xì)胞凋亡率為(31±l2%)顯著大于AngⅡ處理組平滑肌細(xì)胞凋亡率(1
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