尼古丁在腹主動(dòng)脈瘤形成中的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、背景：吸煙是主動(dòng)脈瘤形成和進(jìn)展的重要危險(xiǎn)因素，尼古丁是香煙的主要組成成分。在我們前期研究成果中，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分，尼古丁聯(lián)合血管緊張素II誘導(dǎo)了10-12個(gè)月齡的雄性C57BL/6J小鼠主動(dòng)脈瘤的形成，并檢測(cè)到主動(dòng)脈瘤組織中p-JNK、CD68+、MMP-2和MMP-9高表達(dá)；體外實(shí)驗(yàn)部分，尼古丁誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）在mRNA水平VCAM-1、MMP-2和MMP-9呈劑量依賴性表達(dá)，并可能通過JNK信號(hào)通路發(fā)揮調(diào)控作用。

2、r>　　目的：在前期研究成果基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步研究尼古丁對(duì)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)和活性的影響及機(jī)制；以及尼古丁對(duì)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞趨化因子表達(dá)的調(diào)控作用，對(duì)巨噬細(xì)胞趨化性的影響，再結(jié)合趨化因子在動(dòng)脈瘤組織中的定位表達(dá)，從而闡明尼古丁誘導(dǎo)主動(dòng)脈瘤發(fā)生及早期進(jìn)展的可能分子機(jī)制。
　　方法：第一部分，不同濃度尼古?。?，0.5，5，50，500ng/ml）處理小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（MOVAS）和巨噬細(xì)胞（

3、RAW264.7），觀察對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表達(dá)和活性的影響；JNK抑制劑（SP600125）和α7-nAChRs受體激動(dòng)劑（PNU-282987）處理兩種細(xì)胞，觀察對(duì)尼古丁誘導(dǎo)的MMP-2和MMP-9表達(dá)和蛋白活性的影響。第二部分，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，免疫組化染色法測(cè)定主動(dòng)脈瘤組織中趨化因子MCP-1和RANTES的表達(dá)和定位；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分，尼古丁處理小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，real tim

4、e PCR法和ELISA法檢測(cè)MCP-1和RANTES表達(dá)的影響，進(jìn)一步transwell法觀察尼古丁通過對(duì)MOVAS細(xì)胞的調(diào)控對(duì)巨噬細(xì)胞趨化活性的影響；JNK抑制劑SP600125和α7-nAChRs受體激動(dòng)劑PNU-282987處理MOVAS細(xì)胞，real time PCR法和ELISA法檢測(cè)MCP-1和RANTES表達(dá)的影響，transwell法觀察尼古丁通過介導(dǎo)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞趨化活性的影響。
　　結(jié)果：在主動(dòng)脈

5、平滑肌細(xì)胞，尼古丁以濃度依賴性方式誘導(dǎo)MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性，以及趨化因子MCP-1和RANTES的表達(dá)，0.5ng/ml和5ng/ml時(shí)明顯增強(qiáng)，500ng/ml時(shí)明顯抑制。而SP600125和PNU282987明顯抑制或消除了0.5ng/ml尼古丁產(chǎn)生的上述作用。尼古丁誘導(dǎo)的腹主動(dòng)脈瘤組織中MCP-1和RANTES顯著高表達(dá)于中膜和外膜，尼古丁可以通過介導(dǎo)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞MCP-1和RANTES的表達(dá)調(diào)控巨噬細(xì)胞的趨化活