花生乳中致敏蛋白分離和去除的初步研究.pdf

1、花生是一種重要的食物過敏原來源，過敏患者的數(shù)量逐年上升，目前對花生過敏原的相關(guān)研究大多集中在天然花生原料上，對花生制品類的研究較少，但花生常以制品被食用，為去除過敏原以保證食品安全，本文初步探討了一種花生制品一花生乳中過敏原的分離提取、識(shí)別、酶解及檢測。 以白沙花生為原料，從4種工藝初步篩選出自制花生乳的工藝，選用SDS-PAGE的方法，以濃度為12.5％的分離膠確定了花生乳過敏原的提取工藝和分離工藝，其中，蛋白的提取緩沖液的最

2、適pH值為7.8，4℃時(shí)的最佳離心參數(shù)為7300xg，15min。 利用Westem Blotting免疫印跡法標(biāo)記花生乳中的主要過敏原，熱加工后的自制花生乳中有3條蛋白區(qū)帶能與病人血清特異性IgE結(jié)合，其分子量自大到小依次是：31.3kDa，29.5kDa和23.8kDa，這三條蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，可耐121℃的熱加工處理；選用蒸餾水與含0.1％(m/v)NaHCO<,3>的小蘇打水作為浸泡用液的花生乳相比，后者的蛋白液與花生過敏患

3、者血清IgE結(jié)合的含量更高；選用胰蛋白酶水解可以有效去除花生乳中致敏蛋白，最適水解條件是：酶用量為E/S=1：600，樣品pH7.0，酶解溫度55℃，反應(yīng)時(shí)間4h。 利用間接法ELISA檢測花生乳蛋白中的過敏原，評價(jià)其致敏性，其中，10μg·ml<'-1>作為包被液的最適濃度，HRP-鼠抗人IgE的最適稀釋度為1：200，15min為底物顯色的最佳反應(yīng)時(shí)間；選用胰蛋白酶以最適水解條件水解花生乳中的致敏蛋白，4h內(nèi)可以將花生乳蛋白