促炎物質(zhì)誘導(dǎo)單核細胞IL-37的上調(diào)表達及其對Smads信號通路分子表達的影響.pdf

1、[目的]
　　 研究促炎物質(zhì)對單核細胞IL-37及Smads信號通路分子表達的影響，對IL-37的抗炎作用可能機制進行初步探討。
　　 [方法]
　　 1.分離獲取健康人外周血單個核細胞(PBMCs)，分別用TNF-α和LPS作用PBMCs進行促炎物質(zhì)的刺激實驗，以未予促炎物質(zhì)刺激的PBMCs為對照組，分別用TNF-α和LPS作用PBMCs0.5 h、1h、4h、8h，然后分別用實時熒光定量PCR進行檢測IL-3

2、7及Smads和NF-κB信號通路分子的表達水平。另外，分別用1 ng/ml～100 ng/ml等不同濃度的TNF-α和0.01μg/ml～10μg/ml等不同濃度的LPS刺激PBMCs，用實時熒光定量PCR進行檢測促炎物質(zhì)不同濃度作用PBMCs后，其IL-37及Smads和NF-κB信號通路分子表達水平的變化。
　　 2.用佛波酯(PMA)誘導(dǎo)單核細胞THP-1分化為巨噬樣細胞，以之為靶細胞進行促炎物質(zhì)的相關(guān)刺激實驗，以未予促

3、炎物質(zhì)促炎物質(zhì)刺激的細胞為對照組，分別用TNF-α和LPS作用THP-16h、12h、24 h，然后分別用實時熒光定量PCR進行檢測IL-37表達及Smads和NF-κB信號通路分子的表達水平。另外，分別用1 ng/ml～100 ng/ml等不同濃度的TNF-α和0.01μg/ml～10μg/ml等不同濃度的LPS刺激THP-1，用實時熒光定量PCR檢測IL-37及Smads和NF-κB信號通路分子表達水平的變化。
　　 [結(jié)果

4、]
　　 1.TNF-α、LPS對PBMCs IL-37表達的影響。分別用促炎物質(zhì)TNF-α、LPS刺激PBMCs后，實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，PBMCs經(jīng)30 ng/ml TNF-α作用0.5 h、1h、4h、8h等不同時間后，IL-37 mRNA的表達水平逐漸升高。當TNF-α刺激PBMCs4 h后，其IL-37 mRNA的表達水平與對照組比較具有顯著的差異(P＜0.05）。PBMCs經(jīng)1μg/ml LPS作用0.5

5、h、1h、4h、8h等不同時間后，IL-37 mRNA呈上升表達。當LPS刺激PBMCs1 h時，其IL-37 mRNA的表達水平與對照組比較具有顯著差異(P＜0.05）;作用4h、8h時，其IL-37 mRNA的表達水平與對照組比較，則具有非常顯著的差異(P＜0.01），并隨著刺激時間的延長，IL-37 mRNA的水平呈繼續(xù)上升表達。不同濃度促炎物質(zhì)刺激PBMCs后的檢測結(jié)果顯示，IL-37的表達水平隨著TNF-α和LPS作用濃度的升

6、高，IL-37的表達水平逐漸上升。當TNF-α濃度為30 ng/ml時，IL-37表達至最高水平，高于該作用濃度后，IL-37的表達水平未見明顯升高;當LPS濃度為1μg/ml時，IL-37表達至最高水平，隨著LPS作用濃度的繼續(xù)增加，IL-37的表達水平則未見明顯升高。
　　 2.LPS對PBMCs Smads信號通路分子表達的影響。當用1μg/ml LPS作用PBMCs0.5 h、1h、4h、8h等不同時間后，實時熒光定量P

7、CR結(jié)果顯示，當LPS分別作用PBMCs0.5 h、1h、4h時，Smad2的表達呈上升趨勢，而作用8h時則有所下降;Smad3的表達水平也隨著作用時間的增高而逐漸升高，作用4h時，其表達水平與對照組相比較才具有顯著差異(P＜0.05); Smad7的表達則在LPS作用PBMCs1 h時就顯著升高，與對照組相比較具有顯著差異(P＜0.05），當LPS作用分別上升至4h、8h時，Smad7表達水平的升高與對照組相比較具有非常顯著升高(P＜

8、0.01）。
　　 3.LPS對PBMCs NF-κB信號通路分子表達的影響。當用LPS(1μg/ml)刺激PBMCs0.5 h、1h、4h、8h等不同時間，實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，LPS作用PBMCs8 h時，NF-κB P65表達水平升高與對照組相比較具有顯著差異(P＜0.05);在LPS作用PBMCs0.5 h至8h時，IκBα的水平均呈明顯升高，與對照組相比較都具有顯著的差異(P＜0.05）;當LPS作用PBMCs0

9、.5 h～1 h時，IKKβ的表達水平與對照相比較均具有顯著的差異(P＜0.05)，當作用4h時，則具有非常顯著的差異(P＜0.01），當8h時其表達水平有所下降，但與對照組相比較仍具有顯著差異(P＜0.05）。而LPS作用PBMCs后，IKKα表達盡管有所升高，但與對照組相比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.TNF-α、LPS對THP-1 IL-37表達的影響。THP-1經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化成巨噬細胞后，分別用TNF-

10、α和LPS進行刺激實驗。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，當用30 ng/ml TNF-α作用THP-1后，IL-37 mRNA的表達水平逐漸升高，至作用12h時，其IL-37 mRNA的表達水平與對照組相比較，具有非常顯著的差異(P＜0.01)，作用24 h時達最高峰。另外，當用不同濃度的TNF-α處理THP-1細胞的檢測結(jié)果顯示，當TNF-α濃度為30 ng/ml時，IL-37表達水平達到最高，之后，IL-37的表達水平并沒有隨著TNF-

11、α作用濃度的繼續(xù)增高。當用1μg/ml LPS刺激THP-1后，IL-37 mRNA水平呈上升表達，作用12h、24 h與對照組相比具有顯著差異(P＜0.05)。當用不同濃度的LPS處THP-1理細胞，結(jié)果顯示，當LPS濃度為1μg/ml時，IL-37表達至最高水平，然后IL-37的表達水平并沒有隨著LPS作用濃度的繼續(xù)增高。
　　 5.TNF-α對THP-1 Smads信號通路分子表達的影響。THP-1經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化成巨噬細

12、胞后，用TNF-α進行刺激實驗。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，當用TNF-α(30 ng/ml)刺激6h、12h、24 h等不同時間后，只有刺激24 h時Smad2、Smad3 mRNA的表達水平明顯升高，與對照組相比較具有顯著差異(P＜0.05）。而Smad7的表達水平則在TNF-α作用THP-112 h時就呈顯著升高(P＜0.05），當作用24 h時，Smad7的mRNA表達水平與對照組相比較則具有非常顯著差異(P＜0.01)。

13、>　　 6.TNF-α對THP-1 NF-κ B信號通路分子表達的影響。THP-1經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化成巨噬細胞后，用TNF-α進行刺激實驗。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，經(jīng)TNF-α(30 ng/ml)刺激THP-16h、12h、24 h等不同時間后，NF-κB P65表達水平逐漸升高，但在作用24 h時，NF-κ B P65的表達水平與對照組相比較具有顯著差異（P＜0.05）。IκBα的表達水平在TNF-α作用THP-1后有所升高，至作

14、用24 h時，其表達水平的升高與對照組相比較具有非常顯著的差異(P＜0.01)。IKKα和IKKβ的表達水平在TNF-α作用THP-1后也呈上升表達，但只有在作用24 h時，二者的表達水平與對照組相比較才具有顯著的差異(P＜0.05）。
　　 [結(jié)論]
　　 TNF-α和LPS等促炎物質(zhì)能夠上調(diào)單核細胞IL-37，同時Smad2、Smad3、Smad7等Smads信號通路分子也呈上調(diào)表達且與IL-37上調(diào)表達趨勢基本一致