基底細胞樣乳腺癌中KLK5基因的差異表達及調(diào)控分析.pdf

1、[研究背景]
　　 研究表明在基因或蛋白表達方面有一個或多個基因表達的變化與預后相關(guān)，并被用于乳腺癌的治療。雖然許多有統(tǒng)計意義的相關(guān)性已經(jīng)確定，但絕大多數(shù)還不足以很好地應(yīng)用在臨床上，因為這些基因當中許多和已知的一些生物學標志有關(guān)(如ER、HER2、Ki67)，并且細胞或腫瘤的生物學行為是由許多基因協(xié)調(diào)表達的，這也使得我們不太可能由一個或幾個基因的分析就能精確的預測已知腫瘤的臨床行為?；贒NA芯片的全基因組表達分析被用于轉(zhuǎn)錄組研

2、究，從而鑒定新的預后和預測因子，其中大量基于腫瘤基因表達譜評估的診斷報告已經(jīng)商業(yè)化。基因表達譜分析使得在基因組水平下對所有基因表達水平的評估成為可能。腫瘤細胞行為取決于細胞生長調(diào)控相關(guān)基因的表達模式和細胞行為其它重要方面的相互協(xié)調(diào)。因此，全基因組表達譜分析有助于腫瘤行為的預測，包括發(fā)生遠距離轉(zhuǎn)移危險的預測和對特殊治療反應(yīng)的預測。
　　 [研究目的]
　　 盡管基底細胞樣乳腺癌(basal-like breast canc

3、er BLBC)有特定的形態(tài)、遺傳及臨床特征，但其生物學行為及臨床療效上仍然存在許多差異。許多BLBC子群由于不能被正確鑒定而導致不正確的診斷和/或不適宜的治療。為了解基底細胞樣乳腺癌基因表達譜，它與其他亞型乳腺癌和正常乳腺組織中有明顯差異表達的基因探索作為診斷基底細胞樣乳腺癌的分子標志和治療靶點的可能。
　　 [研究方法]
　　 總體樣本來源于上海長海醫(yī)院的84例乳腺浸潤性導管性癌患者?；颊叨际沁M行了乳腺癌改良根治術(shù)和

4、腋窩淋巴結(jié)清掃，平均年齡49歲，手術(shù)前未接受其他任何治療。根據(jù)篩選要求選出48例，LuminalA/B(ER+，EP+，Her2/neu-)，HER2+(ER-，EP-，Her2/neu+)， basal-like(ER-，EP-，Her2/neu-，CK5+)挑選四種亞型各12例，同時在48例標本中選出6例距離腫瘤組織邊緣至少5 cm的癌旁組織作為對照組。通過包含48804個探針的人類mRNA基因表達譜芯片比較48例各亞型乳腺癌和6例

5、正常乳腺組織基因表達譜。并通過熒光實時定量PCR(RT-PCR)法進行結(jié)果驗證。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1.通過比較乳腺癌標本和正常乳腺上皮組織的基因表達譜，顯示有99個基因明顯上調(diào)超過四倍差異，43個基因下調(diào)超過5倍差異。具有最高FC值的明顯上調(diào)和下調(diào)的基因，KLK5，ART3，F(xiàn)NDC1，CALB2等。雖然每個基因的定量變化在RT-PCR和基因芯片分析中不是完全相關(guān)的，但是這兩種檢測中基因上調(diào)和下調(diào)的趨勢是一致的

6、。它們具有不同的生物學分類。超過30％的基因編碼合成功能不明確的蛋白或不編碼合成任何蛋白。其他的70％基因通過GO分析編碼多種生物功能的蛋白，其功能與細胞粘附、細胞凋亡、細胞增殖和分化相關(guān)。
　　 為了從基因表達分析中獲得上訴結(jié)果的證實，我們選擇了36個上調(diào)和下調(diào)明顯的有統(tǒng)計學意義的基因做熒光定量RT-PCR檢測:IGJ，HBB，MUCL1，HBA2，SLPI，DCD, EEF1A2, BAG4, AGR3,ESM1, TNNT

7、1, AGR3, PIGR, HBA2, CPB1, CGA,ASF1A, MSLN, TIGA1, FABP4, S100A7, CEL, DLK1, PNMT, PIP, TFF3, PTCHD1,MLPH, CITED4, FXA1,TNMD,RDH10, KLK5,ART3, FNDC1,CALB2。
　　 2.在上調(diào)基因中研究分析發(fā)現(xiàn)基因KLK5在BLBC中是顯著上調(diào)的，但KLK5基因在Luminal A、Lumina

8、lB、HER2過表達的乳腺癌組織與正常乳腺上皮細胞的基因表達譜中下調(diào)超過兩倍。通過研究基因表達譜顯示與正常乳腺組織相比，KLK5在LuminalA/B的亞型中、和HER2過表達亞型中低表達，而在BLBC中呈高表達，后通過RT-PCR檢測中得到進一步驗證這一結(jié)果。本研究采用的網(wǎng)絡(luò)信號傳導分析較好地解釋了KLK5的調(diào)控機理。研究分析表明KLK5可能與BLBC的形成、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，很可能成為BLBC一個的新的預測標志和治療靶點。但仍