動物源沙門氏菌耐藥基因及毒力島基因mgtC和sopB的檢測.pdf

1、沙門氏菌(Salmonella)是一種重要的致病菌,它能引起人以及動物疾病。通過流行病學調(diào)查報告表明,沙門氏菌含有的毒力島基因與沙門氏菌病有非常緊密的聯(lián)系。毒力島相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn),對疾病的控制和預防,理解細菌性疾病的發(fā)生和發(fā)展具有很深遠的意義。
　　本課題是利用PCR(PolymeraseChainReation)技術(shù),按照致病性動物源性沙門氏菌的耐藥基因和毒力島特異性基因來設(shè)計引物,通過優(yōu)化擴增條件和引物組合的配對,得到了致病性畜

2、禽沙門氏菌耐藥基因PCR檢測方法以及毒力島基因雙重PCR方法。運用建立的方法對豬源沙門氏菌進行了流行病學調(diào)查,旨在為人畜共患沙門氏菌病的控制和預防提供了充分的理論基礎(chǔ)。
　　具體的研究方法及研究的結(jié)果如下:
　　1、動物源性沙門氏菌四種耐藥基因的PCR檢測
　　該研究對實驗室已經(jīng)分離保存到的24株畜禽沙門氏菌株(雞源10株、豬源14株)進行了藥敏試驗,并設(shè)計6對引物,對氨基糖苷類、四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類和氯霉素類四大類

3、藥物的耐藥基因進行了擴增,建立了耐藥基因的PCR檢測方法,最后對畜禽沙門氏菌的耐藥基因和耐藥性進行了對比,藥敏試驗結(jié)果表明:20株試驗菌株對2種以上抗菌藥物耐藥,多重耐藥率為83.3％,其中2耐5株(25%),4耐7株(35%),5耐5株(25%),7耐2株(10%),8耐1株(5%)。耐藥基因PCR檢測表明:tetA和tetB基因的擴增率對四環(huán)素類藥敏實驗相一致。blaTEM基因的擴增率對氨芐西林和頭孢氨芐的藥敏實驗相一致。對氨基糖苷

4、類耐藥的菌株中aac(3)-Ⅰ和aph(3)-Ⅱ擴增率與菌株對慶大霉素、鏈霉素和新霉素的藥敏實驗相一致。但是氯霉素類耐藥菌株中耐藥基因catI檢出率與菌株對氟苯尼考的和氯霉素的耐藥性結(jié)果相關(guān)性不顯著。
　　2、動物源性沙門氏菌毒力島基因mgtC和sopB的PCR的檢測
　　實驗以沙門氏菌毒力島基因為研究對象,根據(jù)GenBank發(fā)表的沙門氏菌毒力島基因序列,分別設(shè)計合成了沙門氏菌毒力島mgtC和sopB的兩對引物。以沙門氏菌(

5、ATCC9150)菌株的核酸為模板,經(jīng)過引物特異性試驗,DNA模板靈敏度試驗,優(yōu)化反應(yīng)條件,成功的建立了快速鑒別以及檢測沙門氏菌的雙重PCR方法。特異性試驗結(jié)果表明,引物mgtC和sopB建立的雙重PCR僅能擴增出沙門氏菌(ATCC9150)的兩段特異性片段,大小分別是500bp和1000bp。敏感性試驗結(jié)果表明,檢測到的最低濃度是10CFU/mL。
　　此方法能夠?qū)卸玖虻男笄萆抽T氏菌進行檢驗,也能夠?qū)χ虏⌒陨抽T氏菌進行快

6、速的檢測。
　　3、沙門氏菌毒力島雙重PCR檢測方法的應(yīng)用
　　本研究挑取臨床分離的9豬源沙門氏菌,然后對其進行檢驗用已經(jīng)建立好的毒力島雙重PCR方法。研究說明:在9株豬源性沙門氏菌分離株中,有8株菌株被檢測出mgtC基因,此方法的檢測率為88.9%,同樣也有8株被檢測出了sopB基因,檢出率為88.9%。通過檢測結(jié)果顯示:本研究所建立起來的雙重PCR檢測方法靈敏度高、特異性強,該方法對沙門氏菌的快速診斷和對分子流行病學調(diào)查