不同載體轉(zhuǎn)染多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率的比較.pdf

1、目的：用腺病毒感染，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染兩種方法將PDCD5基因?qū)肴硕喟l(fā)性骨髓瘤細(xì)胞KM3和U266，人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞K562、人肝癌細(xì)胞HepG2四種細(xì)胞株，比較其轉(zhuǎn)染效率，并對(duì)PDCD5 mRNA和蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，以探索一種適合MM細(xì)胞的外源基因?qū)敕?，為后續(xù)進(jìn)行PDCD5基因促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究提供載體。
　　方法：利用本實(shí)驗(yàn)已構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pYr-ads-4-PDCD5，設(shè)轉(zhuǎn)染目的基因組、轉(zhuǎn)染空載體組、

2、未轉(zhuǎn)染組三組;構(gòu)建及包裝腺病毒rAd-PDCD5-EGFP，設(shè)置感染目的基因組、感染空載體組、未感染組三組，分別采用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染，腺病毒感染多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞KM3及U266細(xì)胞，人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞K562，肝癌細(xì)胞HepG2，48h后在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率，并予實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，qPCR）、蛋白免疫印跡術(shù)(Western blot)分別檢

3、測(cè)PDCD5在四種細(xì)胞中mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：脂質(zhì)體介導(dǎo)的PDCD5重組質(zhì)粒對(duì)KM3，U266及K562的轉(zhuǎn)染效率分別約為45％，49％，55％，對(duì)HepG2的轉(zhuǎn)染效率約為70％，實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot測(cè)定PDCD5 mRNA表達(dá)水平和PDCD5蛋白表達(dá)水平目的基因組均明顯高于轉(zhuǎn)染空載體組和未轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染空載體組和未轉(zhuǎn)染組間無(wú)明顯差異。腺病毒rAd-PDCD5-EGFP對(duì)KM3及U266感

4、染效率分別為33％，29％，對(duì)K562細(xì)胞感染效率為65％，但對(duì)HepG2細(xì)胞感染效率較高，約為80％，實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot測(cè)定PDCD5 RNA表達(dá)水平和PDCD5蛋白表達(dá)水平目的基因組均明顯高于感染空載體組和未感染組，感染空載體組和未感染組間無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：脂質(zhì)體對(duì)KM3及U266的轉(zhuǎn)染效率高于腺病毒，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對(duì)于骨髓瘤細(xì)胞而言，是一種有效的外源基因轉(zhuǎn)入方式，可為PDCD5基因促M(fèi)M細(xì)胞凋亡