利用淀粉的釀酒酵母工程菌的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、以扣囊復(fù)膜胞酵母菌總DNA、工業(yè)釀酒酵母總DNA和畢赤酵母表達(dá)載體pMETαB為模板,通過PCR擴(kuò)增克隆到約1500bp、2950bp和300bp的α-淀粉酶基因(AMY)、α-乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)和α因子分泌序列(MFα1S),將其分別插入YEp352和pBluescriptM13<'->質(zhì)粒獲得克隆載體pLA6、pLV2和pBLα.克隆載體的酶切分析表明二克隆基因與GenBank的報(bào)道序列基本相同,克隆到的α-淀粉酶基因與

2、GenBank中報(bào)道序列的酶切位點(diǎn)有差異,克隆基因內(nèi)有SacI酶切位點(diǎn),大約距起始密碼子100bp,GenBank中報(bào)道的基因序列無(wú)SacI酶切位點(diǎn);而報(bào)道的α-淀粉酶基因序列在距起始密碼子72bp處有BglI酶切位點(diǎn),克隆α-淀粉酶基因無(wú)BglI酶切位點(diǎn).克隆的乙酰乳酸合成酶基因內(nèi)有一個(gè)XbaI酶切位點(diǎn),而報(bào)道的序列有兩個(gè)酶切位點(diǎn),其它酶切位點(diǎn)均相同.本研究證明通過PCR擴(kuò)增獲得的AMY編碼基因在酵母磷酸甘油酸激酶基因1(PGK1)啟

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