創(chuàng)傷性休克大鼠模型的制作及羥乙基淀粉對(duì)其淋巴細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、研究背景及目的: 嚴(yán)重創(chuàng)傷性休克為青壯年患者的最大死亡原因之一,創(chuàng)傷性休克復(fù)蘇后常出現(xiàn)各種并發(fā)癥,導(dǎo)致住院時(shí)間延長(zhǎng),醫(yī)療費(fèi)用增加.許多學(xué)者在損傷控制、液體復(fù)蘇方法以及復(fù)蘇后機(jī)體免疫紊亂等方面大量的研究表明,在損傷已控制的基礎(chǔ)上有效的容量復(fù)蘇不僅能增加早期復(fù)蘇的成功率,并且能減輕全身的炎癥反應(yīng),改善機(jī)體免疫功能紊亂,降低全身嚴(yán)重感染及多臟器功能衰竭的發(fā)生以提高嚴(yán)重創(chuàng)傷性休克的治愈率.然而在選擇早期復(fù)蘇液體的種類(lèi)上,一直存在著晶體/

2、膠體、自然膠體/人工膠體孰優(yōu)孰劣的爭(zhēng)論,同時(shí)臨床上也缺乏一些評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能紊亂的可靠指標(biāo). 機(jī)體在嚴(yán)重創(chuàng)傷休克時(shí)會(huì)出現(xiàn)毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷及滲漏導(dǎo)致白蛋白及約75﹪輸入的晶體滲至間質(zhì),引起組織水腫并進(jìn)一步加重毛細(xì)血管對(duì)液體的扣押和組織的缺氧,同時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫功能特別是T細(xì)胞功能明顯受抑,表現(xiàn)為T(mén)細(xì)胞IL-2mRNA表達(dá)及產(chǎn)生和分泌減少,IL-2受體表達(dá)降低以及T細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子表達(dá)降低.羥乙基淀粉(HES)具有"堵塞"毛細(xì)血管

3、滲漏的作用,能有效改善微循環(huán)的血液流變學(xué)異常,增加組織氧供.HES可明顯減輕創(chuàng)傷休克后全身炎癥反應(yīng)及血管內(nèi)皮的損傷,同時(shí)可能通過(guò)破壞以血清IL-2,IL-4,IL-10,γ-IFN等水平為標(biāo)志的促炎反應(yīng)及抗炎反應(yīng)的平衡而誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖與分化的改變. HES(130/0.4)作為第三代中分子量(130kd)低取代級(jí)(C2/C6:0.4)羥乙基淀粉產(chǎn)品更具有擴(kuò)容效果佳,體內(nèi)蓄積少,微循環(huán)及組織氧張力改善佳,凝血功能及腎功能障礙等

4、并發(fā)癥少的優(yōu)點(diǎn).本研究的目的為在建立一個(gè)穩(wěn)定可靠的創(chuàng)傷性休克模型的基礎(chǔ)上探討HES(130/0.4)是否能改善創(chuàng)傷性休克大鼠淋巴細(xì)胞的增殖與分化功能紊亂. 對(duì)象與方法: 1.采用"斷股骨+動(dòng)脈放血+液體復(fù)蘇"大鼠創(chuàng)傷性休克的模型.鈍性離斷右股骨作為主要?jiǎng)?chuàng)傷因素.動(dòng)脈快速放血,以平均動(dòng)脈壓降至30mmHg為目標(biāo). 2.分別以不同的復(fù)蘇液體(林格氏液,6﹪HES(130/0.4),5﹪白蛋白)及不同的取材時(shí)間(復(fù)蘇后

5、24,48小時(shí))多組進(jìn)行對(duì)照研究.復(fù)蘇液體量按照大鼠體重計(jì)量. 3.監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷后0,1,3,24小時(shí)血清乳酸,pH值,動(dòng)脈血氧分壓,堿剩余,血清鉀及肌酐濃度等生化指標(biāo)以及腎肺臟器病理改變?cè)u(píng)價(jià)模型的穩(wěn)定性. 4.分別用AnnexinV/PI染色法(流式細(xì)胞儀)及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位末端標(biāo)記法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞凋亡比例. 5.用流式細(xì)胞儀法檢測(cè)創(chuàng)傷前后外周血淋巴細(xì)胞CD4+、CD8+T細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD

6、8+比值. 6.用細(xì)胞內(nèi)因子檢測(cè)法(流式細(xì)胞儀)檢測(cè)創(chuàng)傷前后外周血CD4+細(xì)胞向、TH1/TH2的分化能力. 7.用CD4+/Annexin V法(流式細(xì)胞儀)檢測(cè)脾臟CD4+細(xì)胞凋亡. 8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)用spss12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析.組間采用t檢驗(yàn). 結(jié)果: 1.大鼠創(chuàng)傷性休克模型建立成功,模型鼠能達(dá)到平均動(dòng)脈壓30mmHg的休克要求,具有一定的復(fù)蘇成功率.同時(shí)創(chuàng)傷休克后大鼠血氧合能力,乳酸水

7、平,腎臟功能,電解質(zhì)改變明顯并且穩(wěn)定.肺腎等臟器的病理學(xué)改變亦較為顯著,模型建立成功. 2.創(chuàng)傷休克后CD4+細(xì)胞數(shù)量明顯下降,而HES復(fù)蘇后第48小時(shí),CD4+細(xì)胞數(shù)量即能恢復(fù)到正常水平.CD8+細(xì)胞數(shù)量未發(fā)現(xiàn)明顯改變. 3.創(chuàng)傷性休克后外周血CD4+淋巴細(xì)胞分化出現(xiàn)"TH1向TH2漂移"的改變,且HES能改變此趨勢(shì). 4.與對(duì)照組比較,HES組復(fù)蘇后CD4+T細(xì)胞凋亡比例未呈現(xiàn)先升后降的改變. 5.與

8、對(duì)照組比較,流式細(xì)胞儀法和TUNNEL法均發(fā)現(xiàn)HES組復(fù)蘇后骨髓單個(gè)核細(xì)胞凋亡比例未見(jiàn)明顯升高. 結(jié)論: 1.該創(chuàng)傷性休克動(dòng)物模型可造成機(jī)體明顯的病生理?yè)p傷,且操作簡(jiǎn)便,易控制. 2.創(chuàng)傷性休克后大鼠外周血CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少,CD4+T細(xì)胞的進(jìn)一步分化能力表現(xiàn)為"TH1向TH2漂移",脾CD4+T細(xì)胞及骨髓單個(gè)核細(xì)胞凋亡明顯增加等.機(jī)體細(xì)胞免疫功能受到明顯抑制. 3.羥乙基淀粉(130/0.4