慢性乙醇接觸對(duì)小鼠肝臟孕烷X受體和靶基因Cyp3all的下調(diào)作用.pdf

1、目的:研究慢性乙醇接觸對(duì)小鼠肝臟孕烷x受體(PXR)和Cyp3all基因表達(dá)及CYP3A同工酶～紅霉素N一脫甲基酶(EPoND)活性的影響，并初步探討腸源性細(xì)菌內(nèi)毒素和Kupffer細(xì)胞在此過程中的作用。 方法:為探討慢性乙醇接觸對(duì)小鼠肝臟PXR和Cyp3all基因表達(dá)及ENRD活性的影響，將雌性ICR小鼠隨機(jī)分為單純乙醇高、中、低劑量組和生理鹽水對(duì)照組。單純乙醇不同劑量組每天灌胃給予小鼠不同劑量的乙醇(1，2，4g／kg)，生

2、理鹽水對(duì)照組每天灌胃給予等容量的生理鹽水。為探討腸源性細(xì)菌內(nèi)毒素在慢性乙醇接觸下調(diào)小鼠肝臟PXR和Cyp3all中的作用，乙醇+抗生素組小鼠于每天給予乙醇前0．5h灌胃給予0．15g／kg的多粘菌素B和0．45g／kg的新霉素以抑制腸道細(xì)菌的生長(zhǎng)。為探討Kupffer細(xì)胞在慢性乙醇接觸下調(diào)小鼠肝臟PXR和Cyp3all中的作用，每天灌胃給予小鼠4g／kg乙醇的同時(shí)，每周兩次經(jīng)尾靜脈注射給予GdCl3(10mg／kg)。連續(xù)灌胃5w后剖殺

3、小鼠取肝臟組織，用Trizol一步法提取總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)PXR和Cyp3allmRNA水平。用鈣沉淀法制備肝臟微粒體，Nash法檢測(cè)ENRD活性。 結(jié)果:;小鼠連續(xù)灌胃給予不同劑量的乙醇5w后，肝臟PXR和Cyp3allmRNA水平顯著下降并呈明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系，慢性乙醇接觸也明顯抑制小鼠肝臟微粒體ERND活性?？股仡A(yù)處理顯著降低慢性乙醇接觸引起的小鼠血清內(nèi)毒素水平升高并降低慢性乙醇接觸引起

4、的小鼠肝臟CDl4和TLR4mRNA表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抗生素預(yù)處理顯著逆轉(zhuǎn)慢性乙醇接觸對(duì)小鼠肝臟PXR和Cyp3all基因表達(dá)和ERND活性的下調(diào)。GdCl3處理顯著抑制慢性乙醇引起的TNF-a、IL-1β和IL-6mRNA表達(dá)。GdCl3處理顯著逆轉(zhuǎn)慢性乙醇接觸引起的小鼠肝臟PXR和Cyp3all基因表達(dá)及ERND活性的下調(diào)。 結(jié)論:慢性乙醇接觸對(duì)小鼠肝臟PXR和Cyp3all基因表達(dá)有明顯的下調(diào)作用；腸源性細(xì)菌內(nèi)毒素和肝