2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   許多眼科疾病和外傷,如青光眼、視神經(jīng)缺血、頓拌傷、視神經(jīng)管骨折等,都可以使視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs)不可逆性凋亡,最終導(dǎo)致視覺(jué)功能障礙。目前對(duì)于此類疾患仍無(wú)有效的治療方法。視神經(jīng)和視網(wǎng)膜作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)在顱外的延伸,在動(dòng)物手術(shù)位置上具有優(yōu)越性,因而視神經(jīng)損傷模型又常被用來(lái)模擬CNS的損傷。因此,本研究從組織工程的角度

2、,構(gòu)建大鼠羊膜上皮細(xì)胞(amniotic epithelial cells,AECs)與膠原海綿復(fù)合體,將其移入大鼠視神經(jīng)損傷模型中,探討其對(duì)損傷視神經(jīng)及CNS的作用。
   方法:
   1)取妊娠晚期的SD大鼠,用胰蛋白酶序貫消化法獲得原代AECs,用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)AECs是否表達(dá)CK19、COX10及Nestin,用PKH26標(biāo)記第3代AECs。
   2)構(gòu)建AECs與膠原海綿復(fù)合體,在熒光顯微鏡下

3、觀察復(fù)合體內(nèi)AECs的存活。
   3)將SD大鼠隨機(jī)分為4組:正常組、單純損傷組、空支架組和復(fù)合體組。單純損傷組:在左眼視乳頭后約2mm處用1mm注射器針頭切開(kāi)視神經(jīng)外膜,完全吸除長(zhǎng)約0.5mm的視神經(jīng),保持神經(jīng)外膜的主要血管不受損傷;空支架組:在視神經(jīng)的吸斷處移植相應(yīng)大小的膠原海綿;復(fù)合體組:在視神經(jīng)的吸斷處注入10μl密度為1×107個(gè)/ml的細(xì)胞懸液后,移植相應(yīng)大小的復(fù)合體。
   4)觀察膠原海綿和復(fù)合體與視神

4、經(jīng)的組織相容性。術(shù)后第7天計(jì)數(shù)復(fù)合體內(nèi)的AECs并檢測(cè)其Nestin的表達(dá)。術(shù)后第28天,觀察AECs與再生軸突的關(guān)系。
   5)檢測(cè)復(fù)合體移植對(duì)RGCs的作用:HE染色、尼氏染色、CTB-FITC順行示蹤和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MAP-2在視網(wǎng)膜中的表達(dá)。
   6)檢測(cè)復(fù)合體移植對(duì)視神經(jīng)的作用:HE染色、CTB-FITC順行示蹤和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)GFAP、GAP-43在視神經(jīng)中的表達(dá)。
   7)用Panor

5、ama Maker-5軟件拼接圖片,用Photoshop CS3軟件計(jì)數(shù)和洲量長(zhǎng)度,用Image Pro Plus 6.0軟件測(cè)量面積,用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
   結(jié)果:
   1)體外培養(yǎng)的AECs可以表達(dá)CK19、COX10和Nestin,AECs具有干細(xì)胞特性和向神經(jīng)類細(xì)胞分化的潛能。
   2)復(fù)合體內(nèi)的AECs生物活性好,細(xì)胞密度為604.3個(gè)/mm2,48%的AECs表達(dá)Nestin

6、,復(fù)合體內(nèi)部分細(xì)胞仍具有向神經(jīng)類細(xì)胞分化的潛能。
   3)術(shù)后第28天至第56天,視神經(jīng)內(nèi)基本不見(jiàn)膠原海綿的空間物理結(jié)構(gòu),膠原海綿和復(fù)合體與視神經(jīng)的組織相容性好。術(shù)后7天復(fù)合體內(nèi)存活的AECs密度為424.7個(gè)/mm2,17%的AECs表達(dá)Nestin。復(fù)合體內(nèi)的AECs至少到第28天還有存活,并可向損傷區(qū)兩側(cè)遷移。復(fù)合體內(nèi)的AECs與再生軸突伴行。復(fù)合體內(nèi)AECs存活率較高,部分AECs具有向神經(jīng)類細(xì)胞分化的潛能,復(fù)合體利于

7、改善視神經(jīng)再生的微環(huán)境。
   4)視網(wǎng)膜的尼氏染色顯示:術(shù)后第28天,空支架組節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞直徑≥12μm的細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞總數(shù)多于單純損傷組,復(fù)合體組又多于空支架組;細(xì)胞直徑<12μm的細(xì)胞數(shù)量,空支架組和復(fù)合體組多于單純損傷組。復(fù)合體可增加視網(wǎng)膜內(nèi)各類細(xì)胞的數(shù)量,特別是大細(xì)胞;膠原海綿的作用相對(duì)較小。
   5)視網(wǎng)膜的HE染色顯示:術(shù)后第28天和第56天,各實(shí)驗(yàn)組的節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)、內(nèi)網(wǎng)層厚度和內(nèi)核層厚度均比正常組少。

8、節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù),術(shù)后第28天復(fù)合體組多于單純損傷組和空支架組,術(shù)后第56天復(fù)合體組多于空支架組;內(nèi)網(wǎng)層厚度和內(nèi)核層厚度,術(shù)后第56天復(fù)合體組和空支架組均高于單純損傷組。復(fù)合體比膠原海綿對(duì)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)、內(nèi)網(wǎng)層和內(nèi)核層的增加作用更明顯。
   6)CTB-FITC示蹤的RGCs胞體及其視網(wǎng)膜內(nèi)軸突顯示:術(shù)后第28天和第56天,各實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜中央、中間和外周的CTB-FITC陽(yáng)性區(qū)域面積比例均低于正常組。中央:術(shù)后第28天復(fù)合體組最

9、高,空支架組次之,單純損傷組最低;術(shù)后第56天復(fù)合體組和空支架組均高于單純損傷組。中間:術(shù)后第28天各實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯差異,術(shù)后第56天復(fù)合體組高于空支架組和單純損傷組。外周:術(shù)后第28天各實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯差異;術(shù)后第56天復(fù)合體組高于單純損傷組。復(fù)合體和膠原海綿可增加視網(wǎng)膜內(nèi)存活的RGCs及其軸突,前者效果更為顯著。
   7)CTB-FITC示蹤的視神經(jīng)顯示:術(shù)后第28天和第56天,近側(cè)段和損傷區(qū)的CTB-FITC陽(yáng)性區(qū)域面積比例,

10、復(fù)合體組最高,空支架組次之,單純損傷組最低。復(fù)合體比膠原海綿更能增加再生軸突的數(shù)量,復(fù)合體移植后可促進(jìn)再生的軸突穿過(guò)損傷區(qū)到遠(yuǎn)側(cè)段815μm處。
   8)免疫組織化學(xué)染色顯示:術(shù)后第28天,各實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜每個(gè)視野內(nèi)MAP-2陽(yáng)性物質(zhì)積分光密度均低于正常組,復(fù)合體組最高,空支架組次之,單純損傷組最低,復(fù)合體增加視網(wǎng)膜內(nèi)神經(jīng)元存活的作用強(qiáng)于膠原海綿。術(shù)后第28天和第56天損傷區(qū)GFAP陽(yáng)性物質(zhì)平均積分光密度,單純損傷組復(fù)合體組最高

11、,空支架組次之,復(fù)合體組最低,復(fù)合體使損傷區(qū)GFAP表達(dá)減少的作用大于膠原海綿。術(shù)后第28天組損傷區(qū)GAP-43陽(yáng)性物質(zhì)平均積分光密度,復(fù)合體組最高,空支架組次之,單純損傷組最低,復(fù)合體使損傷區(qū)GAP-43表達(dá)增加的作用大于膠原海綿。
   結(jié)論:
   1)膠原海綿的空間物理結(jié)構(gòu)有利于AECs粘附和生存。
   2)AECs膠原海綿復(fù)合體移植可發(fā)揮AECs與膠原海綿的協(xié)同作用,改善視神經(jīng)軸突再生的局部微環(huán)境,增

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